[发明专利]一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒

摘要

本发明公开了一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒，包括：工作微球探针溶液、人cTn I系列梯度标准品溶液、人CK‑MB系列梯度标准品溶液、人MYO系列梯度标准品溶液，三联急性心肌梗死生物标志物单抗溶液；100×稀释的链霉亲和素藻红蛋白溶液和200×稀释的生物素化鼠抗人二抗IgG溶液；本发明的试剂盒建立了AMI生物标志物的高通量检测方法，可对cTn I、CK‑MB和MYO同时进行快速检测，时间小于2h，适用于AMI的早期诊断、发现，提高对AMI的诊断率，并可在AMI早期筛查、病情监测、疗效观察与复发判断预测等各阶段都具有较高的临床检验应用价值。

主权项

1.一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒，其特征是包括：工作微球探针溶液、人cTn I系列梯度标准品溶液、人CK‑MB系列梯度标准品溶液、人MYO系列梯度标准品溶液，三联急性心肌梗死生物标志物单抗溶液；100×稀释的链霉亲和素藻红蛋白溶液和200×稀释的生物素化鼠抗人二抗IgG溶液；所述工作微球探针溶液用下述方法制成：(1)取编码为35,42和52号的羧基荧光编码微球分别置于三支的离心管中，用100μL pH 7.4的PBS重悬后，使所述羧基荧光编码微球的浓度为1.25×107个微球/mL，分别加入100μL pH 8.0 0.1mol/L的PBS，分别加入新鲜配制的10μL浓度为50mg/mL的EDC水溶液和10μL浓度为50mg/mL的S‑NHS水溶液，室温下搅拌10‑30min，使羧基荧光编码微球活化；所述EDC为1‑乙基‑3‑(3‑二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐的简称；所述S‑NHS为N‑羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐的简称；(2)在装有活化后的35号羧基荧光编码微球的离心管中加入10μg cTn I；在装有活化后的42号羧基荧光编码微球的离心管中加入10μg CK‑MB；在装有活化后的52号羧基荧光编码微球的离心管中加入10μg MYO；分别加pH 7.4的PBS使终体积到500μL，室温下以500‑800rpm旋涡混匀2‑4h，以12,000‑16,000g离心3‑6min，弃去上清液；分别加入100μL封闭缓冲液重悬并封闭交联微球保持20min；离心，弃上清，用pH 7.4的PBS清洗；所述cTn I为肌钙蛋白的简写；CK‑MB为肌酸激酶同工酶的简写；MYO为肌红蛋白的简写；所述封闭缓冲液为：PBS中含有1wt％BSA,0.05wt％叠氮钠，pH 7.4；(3)分别用150μL储备缓冲液重悬步骤(2)获得的微球，用血球计数器确定浓度，用储备缓冲液稀释到3000个/μL，分别得到偶联有cTn I探针微球溶液、偶联有CK‑MB探针微球溶液和偶联有MYO探针微球溶液；(4)分别取偶联有cTn I探针微球溶液、偶联有CK‑MB探针微球溶液和偶联有MYO探针微球溶液50μL，混合，得工作微球探针溶液，工作微球探针溶液中偶联有cTn I探针微球的浓度为1000个/μL，偶联有CK‑MB探针微球的浓度为1000个/μL，偶联有MYO探针微球的浓度为1000个/μL，4℃储存；所述储备缓冲液为PBS中含有0.1wt％BSA,0.02wt％吐温‑20,0.05wt％叠氮钠,pH 7.4。