[发明专利]一种寨卡病毒的可视化检测方法

摘要

本发明涉及一种寨卡病毒的可视化检测方法，该方法包括提取寨卡病毒核酸、采用环介导的扩增体系扩增寨卡病毒NS5基因的RNA片段和采用含待测样品的核酸层析试纸条检测的三个步骤。本发明所述的方法具有特异性好，灵敏度高，快速高效，无污染，能准确、快速检测寨卡病毒的优点，可广泛应用于寨卡感染以及混合感染寨卡病毒的早期鉴别诊断、疫情防控、检验检疫等多个领域，尤其是寨卡病毒流行爆发期大样本量的检测。

主权项

一种寨卡病毒的可视化检测方法，该方法包括以下步骤：(1)取寨卡病毒，按北京全式金生物科技有限公司生产的Easy Pure Viral DNA/RNA Kit的说明书提取寨卡病毒核酸；(2)以步骤(1)得到的寨卡病毒核酸为模板，采用环介导恒温扩增方法扩增寨卡病毒NS5基因的RNA片段，获得核酸扩增产物；所述的环介导恒温扩增方法的引物由一对外引物、一对内引物和一对环引物组成，其中，所述的一对外引物为：Zika‑F3：5’‑TGGGATGTGGTGACTGGA‑3’(SEQ NO.1)；Zika‑B3：5’‑TGCATTGCTACGAACCTTGT‑3’(SEQ NO.2)；所述的一对内侧引物为：Zika‑BIP：5’‑GTCTGGCACCCTAGTGTCCACTCACAGGAATAGCCATGACCG‑3’(SEQ NO.3)；Zika‑FIP：5’‑AGGCACTCGTCAGGTTATGAGCTACAGACTCGTGGCCGTT‑3’(SEQ NO.4)；所述的一对环引物为：Zika‑LF：5’‑TGACCATACGGTGTGGTGT‑3’(SEQ NO.5)；Zika‑LB：5’‑ATGGTCTCTTCCTGGTTGTGG‑3’(SEQ NO.5)；上述环引物Zika‑LB5’端标记生物素(Biotin)，环引物Zika‑LF5’端标记6‑羧基荧光素(6‑FAM)；(3)将核酸层析试纸垂直插入所述的核酸扩增产物中，层析5‑10min，然后按以下方法判读结果：阳性(+)：核酸层析试纸条的检测区和质控区分别出现一条红色条带；阴性(‑)：核酸层析试纸条的质控区出现一条红色条带，而检测区则没有条带；无效：核酸层析试纸条的检测区和质控区均未出现条带；其中，所述的核酸层析试纸条包括条状的塑料支撑片，该塑料支撑片的一表面自一头至另一头依次设有样品垫、聚酯纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述聚酯纤维素膜上喷涂有一层由氯金酸制成的胶体金颗粒上制得的链霉亲和素包被的AuNPs金纳米粒子；所述硝酸纤维素膜上分布有检测区和质控带区，其中检测区是在硝酸纤维素膜上喷涂生物素亲和蛋白形成，质控区是在硝酸纤维素膜上喷涂6‑羧基荧光素抗体形成。