[发明专利]一种芫花茎段外植体初代组织培养方法

摘要

本发明公开了一种芫花茎段外植体初代组织培养方法，包括如下步骤：(1)芫花外植体的选取：采集芫花当年生枝条，去除全部叶片，剪截成带腋芽茎段作为外植体；(2)芫花外植体的处理：将外植体用洗衣粉溶液浸泡洗涤，接着用流水冲洗，进行消毒处理，接入芫花茎段外植体初代组织培养的培养基中；(3)芫花外植体的培养：将接入初代培养基中的外植体置于培养室的培养架进行光照培养，直至诱导丛生芽萌发。本发明采用茎段外植体诱导丛生芽，可以简单、快捷的获得芫花组培苗，培养周期明显缩短，培养成功率明显提高，并且萌芽率高，玻璃化率低。

主权项

1.一种芫花茎段外植体初代组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）芫花外植体的选取：采集生长健壮，腋芽饱满，无病虫害的芫花当年生枝条，去除全部叶片，剪截成8~10cm带腋芽茎段作为外植体；（2）芫花外植体的处理：将外植体用洗衣粉溶液浸泡洗涤15~20分钟，接着用流水冲洗8~12小时，在无菌环境下将外植体剪成4‑5cm茎段进行消毒处理；消毒后用无菌水冲洗，将茎段剪成1.5~2.5cm的长度，接入芫花茎段外植体初代组织培养的培养基中；所述消毒方法为先采用乙醇溶液进行消毒，再将茎段放入升汞加吐温的混合溶液浸泡消毒；所述乙醇溶液体积分数70~75%，消毒时间为30~45s，升汞加吐温混合溶液为1 g•L‑1升汞加3‑5滴吐温80，浸泡时间为10~14min；（3）芫花外植体的培养：将步骤（2）接入初代组织培养基中的外植体置于培养室的培养架进行光照培养，直至诱导丛生芽萌发；所述初代组织培养基包括如下组分：MS+0.1mg·L‑1 NAA+1.0‑1.5mg·L‑1 ZT，加入蔗糖25‑30g/L、琼脂6.5‑7g/L，调整酸碱度至pH=5.7‑5.8。