[发明专利]一种基因缺失突变的高通量筛选方法

摘要

本发明公开了一种基因缺失突变的高通量筛选方法，包括如下步骤细胞处理及连续培养，细胞收集，与荧光抗体的结合，制备上样悬液，细胞分选，细胞扩增和图谱分析。本发明的优点在于(1)操作简单，从收集细胞、与特异性荧光蛋白结合到分选完成，整个过程仅需3‑4小时，提高了CD59基因缺失突变的检测和筛选效率；(2)可快速获得能连续培养的不同突变类型的CD59﹣表型单细胞，有效提高突变分析系统的实验灵敏性、准确性，更体现了本发明的高通量筛选特性。

主权项

一种基因缺失突变的高通量筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)细胞处理及连续培养培养两皿AL细胞至对数生长期分为对照组和处理组，即一皿不做任何处理，另一皿用1‑4μg/mL亚砷酸钠连续处理12‑48小时，再将对照组和处理组AL细胞各以(2.0‑5.0)×105/ml细胞密度重新种植到培养皿中，连续培养6‑8天；(2)细胞收集收取对照组和处理组AL细胞，酶解消化，悬浮于F12完全培养基中，清洗后各制成浓度为±106细胞/100μl的单细胞悬液；(3)与荧光抗体的结合加入80‑120μl预冷的流式细胞缓冲液重悬细胞后，加入荧光标记的CD59特异性抗体，3‑5℃避光反应30‑60分钟后，再用预冷的流式细胞缓冲液清洗离心，去除未结合的抗体；(4)制备上样悬液重悬步骤(3)中所得的两组AL细胞于预冷的流式细胞缓冲液后，获取上样悬液；(5)细胞分选将制备得到的上样悬液送入流式细胞分选仪中，使用流式细胞微孔板分选技术进行单细胞分选；(6)细胞扩增和图谱分析将分选获得的单细胞突变子进行连续培养，扩增后对其突变图谱进行分析。