[发明专利]菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法及应用

摘要

本发明公开了菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法，包括酶解、超滤、强阳离子交换柱色谱分离、凝胶柱色谱分离等步骤，且公开了上述制备方法得到的菲律宾蛤仔抗肿瘤肽在抑制A549非小肺癌上的应用。本发明采用最佳酶解与纯化工艺制备菲律宾蛤仔抗肿瘤肽，超滤获得分子量小于5 KDa的组分并经两步分离纯化，获取得到高活性多肽，整体工艺简单，易于推广应用。

主权项

菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.酶解，取新鲜菲律宾蛤仔，海水吐沙后，放入冰箱冷冻后，开壳取肉，匀浆，料液比1:1，调节pH值2.0，添加胃蛋白酶，加酶量为500～3000U/g，酶解温度31～43℃，酶解时间2～12 h，灭酶后离心，取上层清液；S2.超滤，将步骤S1得到的上层清液进行超滤截留，收集分子量5KDa 以下的截留液，纳滤浓缩脱盐，冷冻干燥；S3.强阳离子交换柱色谱分离，步骤S2中冷冻干燥的产物通过强阳离子交换柱，缓冲液线性洗脱后，在紫外‑可见分光光度计280nm处进行检测，分别收集各洗脱峰，透析除盐，冷冻干燥；将干燥后的各组分进行抗肿瘤活性分析，进一步确定目标肽所在的洗脱峰，并对该洗脱组分大量收集，冷冻干燥；S4.凝胶柱色谱分离，将步骤S3中冷冻干燥后的产物过凝胶柱洗脱，然后在紫外‑可见分光光度计280nm处进行检测，分别收集各洗脱峰，透析除盐，冷冻干燥，将干燥后的各组分进行抗肿瘤活性分析，进一步确定目标肽所在的洗脱峰，并对该洗脱组分大量收集，冷冻干燥即得菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽。