[发明专利]测定槲皮素与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法

摘要

本发明公开了一种测定槲皮素与蛋白结合水平的表面等离子体共振(SPR)分析方法，以槲皮素与蛋白的相互作用体系为分析目标，可以求得该相互作用反应的平衡常数，即结合水平。本方法中，使用吡啶溶解槲皮素并以含有吡啶的缓冲溶液稀释，以解决槲皮素在水溶液中溶解度不足，导致的SPR分析困难的问题，同时分析过程中在配制稀释的槲皮素溶液时均一一对应地配制了相同组分但不含槲皮素的吡啶的稀释溶液，用于表征吡啶对SPR信号的影响，以准确获得槲皮素产生的相互作用信号。

主权项

一种测定槲皮素与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法，包括以下步骤：1)对洁净的传感芯片进行表面羧基化修饰；2)筛选用于溶解目标蛋白的缓冲液的pH值；3)对传感芯片表面修饰的羧基进行活化；4)将目标蛋白溶解于步骤2)选定pH的缓冲液中，使之流经步骤3)活化的芯片表面，将目标蛋白共价结合到芯片上；5)配制槲皮素浓度为c1、c2、…、ci的系列溶液，其中i为自然数；6)按浓度由稀至浓的顺序将步骤5)配制的槲皮素溶液送入表面等离子体共振仪中，通过步骤4)处理后的传感芯片，记录每一个浓度为ci的槲皮素溶液进样且信号稳定后的信号值Ri，同时，记录不含有槲皮素但其他成分相同的对照溶液进样且信号稳定后的信号值ri；7)数据分析：计算各个1/ci和1/(Ri‑ri)，并以1/(Ri‑ri)对1/ci作图，1/ci为横坐标，1/(Ri‑ri)为纵坐标；对图中数据点进行线性拟合，所得方程的截距记为b，斜率记为a，则结合反应的平衡常数为b/a，单位为实验中所用浓度单位的倒数。