[发明专利]一种快速检测褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性的方法

摘要

本发明基于环介导恒温扩增技术(LAMP)建立一种褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性的快速检测方法，属于抗药性综合治理和褐飞虱综合防治范畴。该检测方法通过在褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗性靶标变异个体(A302S)的γ‑氨基丁酸受体(GABA receptor)上设计2对特异性引物，进行LAMP扩增，根据反应产物颜色判定是否为褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂的抗性个体。其特征在于如下步骤实现：提取单头褐飞虱2‑3龄若虫基因组DNA；所使用的特异性引物；LAMP反应体系；LAMP反应程序；扩增产物的颜色检测。该方法稳定性高、周期短、灵敏度高，适合褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗性的早期检测。

主权项

一种基于环介导恒温扩增技术(LAMP)的褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性快速分子检测方法，其特征在于如下步骤实现：(1)提取单头褐飞虱2‑3龄若虫基因组DNA；(2)LAMP反应体系 2.5μL10×Isothermal Amplification Buffer，8U Bst 2.0DNA polymerase，1μL单头褐飞虱基因组DNA，终浓度0.25mmol/L的dNTPs、1mmol/L的MgSO4、0.2μmol/L的外引物、1.2μmol/L内引物、0.6mol/L的betaine，200mmol/L羟基萘酚蓝(HNB)加双蒸水至反应总体积为25μL；其中所述的外引物F3：GTGACACGTGCAGGAAACT；B3：GGCGTTGGTGGATGACATG；内引物FIP：AGCCCCGACGGAATGTAGATCT‑GCGTGCGAGATCCAGTTC；BIP：TATCGTGGGTCTCGTTCTGGCT‑GTGGTGACGCCGAGTGAC；(3)LAMP反应程序 64℃60‑70min；(4)结果判定 反应结束后，反应液为天蓝色，说明样品为抗性个体；反应液仍为紫色，说明样品为敏感个体。