[发明专利]一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法

摘要

本发明公开了一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，步骤如下：1)取猴头菌发酵菌丝体，采用高纯度乙醇提取，过滤，减压浓缩回收乙醇，再经石油醚和乙酸乙酯萃取得粗提物；2)以氯仿、二氯甲烷、甲醇和水体积比4:2:3:2的混合液作为两相溶剂体系，静置分层后上相作为固定相，下相作为流动相；经高速逆流色谱分离后得到黄酮类化合物。本方法简便，重现性好，可用于化合物的大量制备，为进一步活性研究提供奠定了物质基础。

主权项

1.一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于所述方法步骤如下：A、猴头菌发酵菌丝体粗提物的制备：取猴头菌发酵菌丝体，用乙醇或乙醇水溶液为提取剂提取，收集提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇，得到乙醇提取物；将乙醇提取物依次通过石油醚萃取取石油醚层，再以乙酸乙酯萃取取乙酸乙酯层，蒸馏挥去溶剂干燥后得到猴头菌发酵菌丝体粗提物；B.高速逆流色谱法分离：以氯仿、二氯甲烷、甲醇和水的混合液作为两相溶剂体系，充分混合后静置分层，两相分离后超声脱气，上相作为固定相，下相作为流动相；将固定相充满高速逆流色谱仪的色谱柱，设定高速逆流色谱仪，在900～1000r/min转速下，水浴温度为15～25℃的条件下，以2～3ml/min的流速注入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态，用上相、下相体积比为1:1的混合溶剂溶解猴头菌发酵菌丝体粗提物，制备得样品溶液进样，以波长为254nm的紫外检测器检测，根据紫外检测器光谱图的峰形收集流出液，将收集到的流出液用高效液相色谱进行检测，将出峰及保留时间相同的流出液合并，浓缩后冷冻干燥，得到目标产物黄酮类化合物，所述的黄酮类化合物为金雀异黄酮；所述两相溶剂体系中氯仿：二氯甲烷：甲醇：水的体积比为4～6:2～4:3～5:2～3。