[发明专利]软骨细胞体外端粒延长增殖培养的方法及人源组织工程化再生软骨有效
申请号: | 201710209310.8 | 申请日: | 2017-03-31 |
公开(公告)号: | CN106967686B | 公开(公告)日: | 2019-11-08 |
发明(设计)人: | 吴海涛 | 申请(专利权)人: | 北昊干细胞与再生医学研究院有限公司;冠昊生物科技股份有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/54;A61L27/38;A61L27/24 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 林青中;万志香 |
地址: | 510630 广东省广州市黄埔区*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种软骨细胞体外端粒延长增殖培养的方法及人源组织工程化再生软骨。通过在体外对软骨细胞进行端粒酶mRNA转染,使后续培养得到的软骨细胞中端粒延长,并且在端粒酶mRNA的转染与完全培养基中维生素C、B18R或p65i、雷帕霉素和白藜芦醇等小分子化合物的协同作用下,可以显著提高软骨细胞尤其是老龄患者的软骨细胞的增殖与活力,对于改善或治疗衰老引起的细胞功能衰退,使其实际应用于再生医学治疗,具有重大意义。上述软骨细胞体外端粒延长增殖培养的方法使得软骨细胞端粒的延长不是连续的甚至频繁的,无基因组插入诱变风险,也无细胞永生化成瘤风险,在安全性和应用性上有了大大的提高,使之在再生医学治疗上有更好的应用。 | ||
搜索关键词: | 软骨 细胞 体外 端粒 延长 增殖 培养 方法 组织 工程 再生 | ||
【主权项】:
1.一种软骨细胞体外端粒延长增殖培养的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:制备具有如序列表中SEQ ID No.1所示cDNA序列对应的RNA序列的端粒酶mRNA;步骤二:将所述端粒酶mRNA在完全培养基中转染传代培养的人软骨细胞,所述完全培养基是在DMEM/F12或RPMI1640基础培养基中加入血清、终浓度为5‑50μg/ml的维生素C、终浓度为0.01‑2μg/ml的B18R或p65i、终浓度为0.1‑50ng/ml的雷帕霉素和终浓度为0.1‑50μM的白藜芦醇制备得到,所述血清是体积终浓度为1%‑20%的人AB血清或体积终浓度为1%‑20%的胎牛血清;步骤三:将转染后的细胞继续使用所述完全培养基进行培养。
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