[发明专利]一种基于基因敲除细胞的阳性筛选体系的建立方法在审
| 申请号： | 201710211257.5 | 申请日： | 2017-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN107868798A | 公开（公告）日： | 2018-04-03 |
| 发明（设计）人： | 李顺;周晓辉;陈丽香;彭秀华;赵锐;诸蒋鸣 | 申请（专利权）人： | 上海市公共卫生临床中心 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 201508 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于动物生物技术领域，涉及一种基于基因敲除细胞的阳性筛选体系的建立方法，并利用建立的系统在NIH/3T3细胞中对p53和MAD2基因进行敲除，并对发生基因敲除的细胞进行阳性筛选。本发明中在NIH/3T3细胞系中定点敲除p53基因第六外显子和MAD2基因第一外显子的目标序列，并结合绿色荧光蛋白基因和嘌呤霉素基因分别对发生p53和MAD2基因敲除的细胞进行阳性筛选，利用建立的阳性筛选体系在活体小鼠肝脏中同时对p53和MAD2基因进行编辑最终获得小鼠肝癌模型。本发明为在活体小鼠中编辑p53和MAD2基因的相关研究奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 基因 细胞 阳性 筛选 体系 建立 方法 | ||
【主权项】：
一种基于基因敲除细胞的阳性筛选体系的建立方法，其特征在于，其包括：利用CRISPR/Cas9系统在NIH/3T3细胞中对p53基因第六外显子和MAD2基因第一外显子进行定点突变，并将GFP和抗嘌呤霉素基因结合到CRISPR/Cas9系统中，利用嘌呤霉素对转入了CRISPR/Cas9系统的细胞进行筛选，结合荧光显微镜观察GFP荧光步验证嘌呤霉素筛选发生基因敲除的细胞，建立基于基因敲除细胞的阳性筛选体系。
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