[发明专利]一种用于LC-MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法

摘要

本发明属于化学分析检测领域，具体涉及一种用于LC‑MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法。所述方法包括：黄曲霉菌菌株培养；黄曲霉菌淬灭；黄曲霉菌细胞被膜破碎及代谢组提取；黄曲霉菌代谢组分析。本发明采用冷甘油缓冲溶液结合快速抽滤法进行淬灭，以MeOH/DCM/ACN/EA/HCOOH混合溶液作为提取溶液，实现了高效提取不同极性化合物的目标，代谢组化合物覆盖率高；采用本发明所述方法对黄曲霉菌细胞代谢组学进行前处理可以保证代谢组学分析方法的可重复性、稳定性，降低检测结果的假阳性。

主权项

1.一种用于LC‑MS检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）黄曲霉菌菌株培养：黄曲霉菌在固体培养基培养后，用无菌水将孢子从培养基上洗下，然后接种至液体培养基中扩培后得到黄曲霉菌样品；（2）黄曲霉菌淬灭：将步骤（1）所得黄曲霉菌样品加入到冷甘油缓冲溶液淬灭剂中，快速混合涡旋、均质，然后置于低温条件下冷却，再通过真空抽滤快速过滤混合液，收集固体样品，冷冻干燥；（3）黄曲霉菌细胞被膜破碎及代谢组提取：将步骤（2）冷冻干燥所得黄曲霉菌细胞样品破碎，利用代谢组提取液进行提取处理，再经离心、膜过滤后得到代谢组提取溶液；所述代谢组提取液是由甲醇、二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯和甲酸按体积比20~30：20~30：20~30：20~30：1~2混合形成；（4）黄曲霉菌代谢组分析：步骤（3）所得代谢组提取溶液进入HPLC‑MS系统进行分析检测，然后依据所得谱图进行黄曲霉菌代谢组分析。