[发明专利]唾液酸酶基因重组表达载体及其构建方法,唾液酸酶及其制备方法有效
申请号: | 201710230450.3 | 申请日: | 2017-04-10 |
公开(公告)号: | CN106906236B | 公开(公告)日: | 2020-04-10 |
发明(设计)人: | 王少露;贺丽生;王勇 | 申请(专利权)人: | 中国科学院深海科学与工程研究所 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/66;C12N9/24 |
代理公司: | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙) 44316 | 代理人: | 赵勍毅 |
地址: | 572000 *** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | 一种唾液酸酶的制备方法,包括如下步骤:制备唾液酸酶基因片段;将唾液酸酶基因片段克隆到pMD‑18T中,得到连接产物,将连接产物转化E.coliJM109,挑选阳性克隆子测序,获得如SEQ ID NO:1所示的基因序列;将阳性克隆子和原核表达载体连接,得到重组表达载体;将重组表达载体转化得到重组工程菌;对重组工程菌进行发酵诱导表达、纯化,得到唾液酸酶。上述唾液酸酶的制备方法,通过细菌基因组DNA的提取、PCR扩增、构建重组表达载体、转入宿主细胞构建重组表达细胞、重组表达细胞的培养及诱导表达、从培养的宿主细胞中分离、纯化蛋白酶,蛋白酶酶学性质的分析。上述唾液酸酶的制备方法制备得到的唾液酸酶耐高温、耐Ph,为工业和社会应用提供更多的基础材料和科学依据。 | ||
搜索关键词: | 唾液酸 基因 重组 表达 载体 及其 构建 方法 制备 | ||
【主权项】:
一种唾液酸酶基因重组表达载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:制备唾液酸酶基因片段;将所述唾液酸酶基因片段克隆到pMD‑18T中,得到连接产物,将所述连接产物转化E.coliJM109,挑选阳性克隆子测序,获得如SEQ ID NO:1所示的基因序列;将所述阳性克隆子和原核表达载体连接,得到所述唾液酸酶基因重组表达载体。
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