[发明专利]对昆虫蛋白或昆虫表达系统表达的外源蛋白进行标记的方法有效
| 申请号： | 201710248915.8 | 申请日： | 2017-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN108728397B | 公开（公告）日： | 2022-05-20 |
| 发明（设计）人： | 李学兵;张振宁;傅立峰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07;C12N15/866;C07K14/435;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京信慧永光知识产权代理有限责任公司 11290 | 代理人： | 朱学珺;董世豪 |
| 地址： | 100101 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种对昆虫来源的蛋白进行标记的方法。所述方法借助昆虫自身代谢通路将叠氮修饰的全乙酰化N‑乙酰氨基葡萄糖掺入至昆虫表达的蛋白的糖基，随后通过点击化学反应，将可检测标记物偶联至蛋白，从而实现对昆虫来源的蛋白的标记。所述方法可用于原位标记昆虫细胞或标记昆虫表达系统所表达的外源蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 昆虫 蛋白 表达 系统 进行 标记 方法 | ||
【主权项】：
1.一种对昆虫细胞中的糖蛋白进行原位标记的方法，所述方法包含如下步骤：(i)在昆虫细胞培养基中添加叠氮修饰的全乙酰化N‑乙酰氨基葡萄糖，将昆虫细胞接种入所述培养基中并对所述昆虫细胞进行培养，得到细胞悬液；(ii)收集步骤(i)得到的细胞悬液，离心，得到所述细胞的沉淀；(iii)对步骤(ii)获得的所述沉淀中的细胞进行固定；(iv)向步骤(iii)的经固定的细胞中添加连接有炔基或三芳基膦的可检测标记物，从而将所述标记物偶联至所述细胞内的糖蛋白；(v)对所述可检测标记物进行检测。
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