[发明专利]一种细胞和组织全蛋白提取方法

摘要

一种细胞和组织全蛋白提取方法，分别采用变性裂解液以及非变性裂解液作为试剂，采用离心机、1.5ml离心试管和中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯离心试管作用提取工具，经以下几个步骤制得，第一步，把细胞放于1.5ml离心试管中，并加入1ml的 PBS细胞洗涤溶液，然后用离心机离心3分钟，弃除上清，离心、弃除上清流程共重复三次，第二步，根据细胞沉淀体积加入预冷的PBS细胞洗涤溶液，进行细胞重悬，第三步，根据离心试管内细胞量加入变性裂解液，震荡15s，第四步，将震荡后裂解液转移于50ml柱形聚乙烯离心试管内，离心机离心30s 后，收集管底的裂解液即为全细胞蛋白提取液，第五步，加入蛋白酶抑制剂。本发明能提高速度和减少蛋白丢失。

主权项

一种细胞和组织全蛋白提取方法，其特征在于分别采用变性裂解液以及非变性裂解液作为提取试剂，采用离心机、多只1.5ml离心试管和多只中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯离心试管作用提取工具，在采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白时，采用以下几个步骤制得，第一步，把1ml具有0.5至2之间×107个数的细胞放于1.5ml离心试管中， 1.5ml离心试管内加入1ml预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，然后把1.5ml离心试管用离心重力加速度1,000xg的离心机离心3分钟，停止离心后，弃除1.5ml离心试管内上层清液，离心、弃除上清流程共重复操作三次，第二步，将重复三次离心、弃除上清后细胞，根据细胞沉淀体积加入同体积的预先冷却的PBS细胞洗涤溶液，进行细胞重悬操作，接着将重悬后细胞用离心机离心弃出上层清液，第三步，根据离心试管内细胞量加入对应量的变性裂解液，剧烈震荡15s，第四步，将震荡后裂解液转移于50ml柱形聚乙烯离心试管内，采用转速14,000 rpm 离心机离心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯离心试管管底的裂解液即为全细胞蛋白提取液，第五步，将全细胞蛋白提取液内加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，即完成采用变性裂解液作为提取试剂提取细胞组织中全蛋白工序。