[发明专利]一种用于冬虫夏草真伪鉴定的二重PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种用于冬虫夏草真伪鉴定的二重PCR检测方法，解决了现有技术中仅针对真菌来进行冬虫夏草鉴定从而缺乏足够准确性的问题。本发明在同一PCR反应体系中同时检测虫草菌的ITS和虫草菌寄主的COI基因核酸片段，用于鉴定所述COI基因核酸片段的扩增引物组为：COI‑F：GGAAATCCHGGATCTTTAATTCOI‑R：GATGCCCCMGARTGTGCAAT；用于鉴定所述ITS的扩增引物组为：CITS‑F10’：GTTGCCTCGGCGGGACCITS‑R10’‑2：CMTTTGCTTGCTTCTTGACTGAG。本发明方法操作简便，针冬虫夏草的鉴别特异性强，准确度高，重复性好，适宜推广。

主权项

1.一种用于冬虫夏草真伪鉴定的二重PCR检测方法，其特征在于：在同一个PCR反应体系中同时检测冬虫夏草中虫草菌的ITS和所述虫草菌寄主的COI基因核酸片段，用于鉴定所述COI基因核酸片段的扩增引物组为：COI-F：GGAAATCCHGGATCTTTAATTCOI-R：GATGCCCCMGARTGTGCAAT；用于鉴定所述ITS的扩增引物组为：CITS-F10’：GTTGCCTCGGCGGGACCITS-R10’-2：CMTTTGCTTGCTTCTTGACTGAG；所述检测方法包括以下步骤：步骤1：合成引物组：合成所述用于鉴定ITS的扩增引物组和用于鉴定COI基因核酸片段的扩增引物组；步骤2：制备待检测样品DNA稀释液、阳性对照品DNA稀释液、以及空白对照液；步骤3：配制PCR反应体系；步骤4：PCR及电泳检测；其中，所述步骤4中的电泳检测为将PCR反应后所得的扩增产物用2.5 %琼脂糖凝胶70V电泳40 min后凝胶成像仪照相分析，若阳性对照和待检测样品均扩增出113 bp和302 bp两条目标条带，而空白对照未出现条带，则可判定待检测样品中含有冬虫夏草成分；若阳性对照扩增出113 bp和302 bp两条目标条带，空白对照未出现条带，待检测样品未扩增出条带，则可判定待检测样品中不含有冬虫夏草成分。