[发明专利]澳洲坚果的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种澳洲坚果的组织培养方法，包括以下步骤步骤一、剪取澳洲坚果成年结果树的结果枝当年抽生枝条，切下梢基部的发育未完全的叶，取叶腋里带芽的叶作外植体；步骤二、接入第一固体培养基进行初代培养10天；步骤三、接入第二固体培养基进行继代培养60天；步骤四、接入第三固体培养基进行生根培养30天；步骤五、接入第四固体培养基再次进行生根培养30天；组培箱中设置黄光灯管与紫光灯管，期间喷布雾化的液体培养基。本发明从结果枝当年抽生枝条带芽的叶作外植体进行组织培养，在培养基中添加不同浓度的激素和营养物质，配合适当的LED光源照射，提高澳洲坚果外植体的萌芽率、增殖率、芽苗伸长长度以及生根率。

主权项

一种澳洲坚果的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、剪取澳洲坚果成年结果树的结果枝当年抽生枝条，切下梢基部的发育未完全的叶，取叶腋里带芽的叶作外植体，用1g/L升汞浸泡3min后用无菌水冲洗，重复5次；步骤二、接入第一固体培养基进行初代培养10天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照6h、光照强度2000lux，人工光照6h、光通量密度为80μmol/m2·s，第一固体培养基为1/2MS、7g/L的琼脂、15g/L的蔗糖、2g/L的碳粉、15g/L的糖蜜发酵液、15mg/L的蛋白胨，pH为5.8；步骤三、接入第二固体培养基进行继代培养60天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照5h、光照强度2000lux，人工光照7h、光通量密度为80μmol/m2·s，第二固体培养基为1/2MS、2mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、10mg/L的赤霉素、15g/L的琼脂、15g/L的蔗糖、15g/L的糖蜜发酵液、2g/L的肌醇、1mg/L的烟酸、5mg/L的多效唑，pH为5.8；步骤四、接入第三固体培养基进行生根培养30天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照4h、光照强度2000lux，人工光照8h、光通量密度为80μmol/m2·s，第三固体培养基为1/2MS、2mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的赤霉素、2mg/L的吲哚丁酸、15g/L的琼脂、15g/L的蔗糖、15g/L的糖蜜发酵液、1mg/L的盐酸硫胺素、2g/L的肌醇、1mg/L的钼酸钠、5mg/L的硼酸，pH为5.8；步骤五、接入第四固体培养基再次进行生根培养30天，培养温度为25℃、光照12h/天，其中，自然光照3h、光照强度2000lux，人工光照9h、光通量密度为80μmol/m2·s，第四固体培养基为1/2QL、2mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的赤霉素、2mg/L的吲哚丁酸、5mg/L的萘乙酸、15g/L的蔗糖、15g/L的糖蜜发酵液、2mg/L的盐酸吡哆醇、80mg/L的乙二胺四乙酸二钠，pH为5.8；其中，步骤二～五均在组培箱中进行，组培箱中设置等数量的黄光灯管与紫光灯管，黄光灯管的波长为580nm，紫光灯管的波长为410nm，步骤二的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为1:1，期间喷布雾化的液体培养基，喷布10min、暂停5min，重复4次，步骤三的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为5:7，期间喷布雾化的液体培养基，喷布15min、暂停5min，重复6次，步骤四的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为1:2，期间喷布雾化的液体培养基，喷布20min、暂停10min，重复6次，步骤五的人工光照时，黄光灯管与紫光灯管的启动数量比为1:3，期间喷布雾化的液体培养基，喷布30min、暂停10min，重复6次，所述液体培养基为1/2MS、20g/L的蔗糖。