[发明专利]一种监控荧光定量PCR反应污染的方法

摘要

本发明公开了监控荧光定量PCR反应污染的方法，其包括下列步骤制备阳性对照质粒，该阳性对照质粒上包含待检目的基因和外参基因，该待检目的基因和外参基因不同源或同源性低至两者的相应引物不会错配；制备PCR反应混合物，在待检样品管中加入待检样品DNA模板，在阳性对照管中加入阳性对照质粒DNA模板，进行PCR扩增；待检样品管中扩增的外参基因应全部为阴性，否则确定待检样品被阳性对照质粒气溶胶污染；阳性对照管中扩增的内参基因应全部为阴性，否则确定被PCR产物气溶胶污染。本发明方法可以有效地监控PCR气溶胶污染，特别地在基因分型方法中监控PCR气溶胶污染。

主权项

一种监控荧光定量PCR反应污染的方法，其包括下列步骤：a.制备阳性对照质粒，该阳性对照质粒上包含待检目的基因和外参基因，该待检目的基因和外参基因不同源或同源性低至两者的相应引物不会错配；b.制备PCR反应混合物，其包含：目的基因的引物和荧光探针；内参基因的引物和荧光探针；外参基因的引物和荧光探针；所述各个荧光探针具有不同的荧光基团；c.在待检样品管的PCR反应混合物中加入待检样品DNA模板，在阳性对照管的PCR反应混合物中加入阳性对照质粒DNA模板，进行PCR扩增；d.所有检测管中扩增的目的基因应全部为阳性，否则确定扩增失败；e.待检样品管中扩增的内参基因应全部为阳性，否则确定扩增失败；f.待检样品管中扩增的外参基因应全部为阴性，否则确定待检样品被阳性对照质粒气溶胶污染；g.阳性对照管中扩增的内参基因应全部为阴性，否则确定被PCR产物气溶胶污染；h.阳性对照管中扩增的外参基因应全部为阳性，否则确定扩增失败。