[发明专利]一种乳液中进行环介导等温扩增的数字miRNA分析方法

摘要

本发明提供了一种乳液中进行环介导等温扩增的数字miRNA分析方法。本发明的技术方案是以引物标记的磁珠为载体，在稳定的乳液液滴中发生环介导等温扩增反应，磁珠在反应后生成大量的扩增产物并捕捉与之互补的荧光标记引物，破乳后收集反应磁珠，通过显微镜和流式细胞仪对目标DNA/mRNA实现数字核酸分析的目的。本发明所述的数字miRNA分析方法的建立为基因诊断和基因治疗等研究提供了一种工艺简单、信号稳定、具有较高的灵敏度与准确性的数字miRNA分析手段。

主权项

一种用于环介导等温扩增的数字miRNA分析方法的乳液，其特征在于：包括水相和油相：所述水相由生物素标记的引物与亲和素标记的磁珠复合物、目标miRNA介导的连接DNA模板、荧光标记的引物、反应缓冲溶液、Bst聚合酶按体积比(3～6)：(0.5～2)：(2～6)：(8～13)：(3～8)混合均匀；所述油相由DC5225C、DC749、Ar20按质量比(3～5)：(2～4)：(2～4)混合均匀；将所述水相和油相按体积比1:2～1:3加入反应管中研磨，得到稳定乳液。