[发明专利]转gshB基因提高龙葵毛状根Cd富集的方法

摘要

本发明公开一种转gshB基因提高龙葵毛状根Cd富集的方法，通过构建植物过表达载体将gshB基因转入发根农杆菌A4获得转gshB基因侵染菌液，然后转gshB基因侵染菌液与龙葵外植体共培养，诱导出含有gshB基因的龙葵毛状根，对获得的转gshB基因龙葵毛状根扩大培养，并进行分子鉴定和荧光检测。本发明进一步对获得的转gshB基因龙葵毛状根的Cd富集含量测定表明所能富集的Cd的含量最高可达野生龙葵植株的2倍。本发明不仅可以解决龙葵植株栽培周期长、受气候及地理条件制约等问题，并且可高效大量地富集重金属Cd，为利用龙葵毛状根富集重金属Cd提供材料支撑，具有广阔的开发和应用前景。

主权项

一种转gshB基因提高龙葵毛状根Cd富集的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备龙葵外植体；(2)制备转gshB基因侵染菌液：将gshB基因与真核表达载体PBI121‑gfp连接，将连接产物用热激法转化发根农杆菌A4感受态细胞；涂平板，挑取阳性克隆，转入含有卡那抗性的YMA液体培养基扩增培养，得到转gshB基因侵染菌液；(3)共培养诱导转gshB基因龙葵毛状根：将转gshB基因侵染菌液与龙葵外植体进行共培养；(4)除菌培养：将共培养后的龙葵外植体转移到已湿润的滤纸上于28℃弱散射光培养2d，随后转入含有500mg/L的头孢噻肟钠的MS培养基上进行除菌培养，一周后转到不含头孢噻肟钠的MS固体培养基上，一个月后龙葵外植体愈伤处会长出的细长毛状根；(5)毛状根液体培养基的扩大培养：将毛状根转入MS液体培养基中，扩大培养；(6)转gshB基因龙葵毛状根的检测。