[发明专利]一种利用两步酶解法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法

摘要

本发明公开了一种利用两步酶解法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法。具体涉及一种以黄芪甲苷为底物，利用两种不同的水解酶分别水解断裂黄芪甲苷C3位置的β‑木糖苷键和C6位置的β‑葡萄糖苷键而得到黄芪甲苷的苷元环黄芪醇，后经萃取、硅胶柱层析以及乙醇重结晶纯化得到纯度95％以上的环黄芪醇产品。本发明解决了化学法制备环黄芪醇过程中黄芪甲苷的三元环结构的破坏而导致的大量副产物的产生的问题以及克服了传统环黄芪醇制备方法中底物转化率低、步骤繁琐、污染环境等不足。而本发明的优点在于底物特异性高，底物黄芪甲苷全部转化，步骤简单，条件温和，成本低，是温和的生物制备方法，对环境无污染，适合工业化生产。

主权项

一种利用两步酶解法转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：A.酶解缓冲液的配制准确配制0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L的柠檬酸溶液，将两种溶液按照1.06:1的体积比混合，并用盐酸调节混合溶液的pH至5.0；B.第一步酶解向步骤A中配制好的酶解缓冲体系中加入底物黄芪甲苷，底物中黄芪甲苷的质量百分比为10％，体系中黄芪甲苷的质量浓度为0.1g/L～1g/L；待底物完全溶解后加入水解酶1，水解酶1和黄芪甲苷的质量比为5:1；调节反应体系的pH为4.6～5.2，最后将反应体系置于温度45～55℃和搅拌转速为200r/min的条件下充分反应48～72h；C.第二步酶解用盐酸调节步骤B中反应结束后的体系pH至7.0～7.6，再向该体系中加入水解酶2，水解酶2和黄芪甲苷的质量比为50:1，最后将反应体系置于温度为25～35℃和搅拌转速为200r/min的条件下充分反应48～72h；D.环黄芪醇的分离纯化将步骤C中含有产物环黄芪醇的水解液经水饱和正丁醇萃取后真空浓缩蒸干得到萃取产品，并进一步利用硅胶柱层析分离纯化，最终再通过乙醇重结晶将产品的纯度提高到95％以上，得到环黄芪醇产品；步骤B中所用的水解酶1为纤维素酶，水解断裂的是黄芪甲苷C3位置的β‑木糖糖苷键；步骤B中得到酶解产物是6‑O‑葡萄糖‑环黄芪醇；步骤C中水解酶2为β‑葡萄糖苷酶，水解断裂的是中间产物6‑O‑葡萄糖‑环黄芪醇上C6位置的β‑葡萄糖苷键；步骤C中β‑葡萄糖苷酶的底物为6‑O‑葡萄糖‑环黄芪醇，步骤C中得到的产物为环黄芪醇。