[发明专利]一种利用真核表达系统制备HIV‑1gp120的方法在审
| 申请号： | 201710371571.X | 申请日： | 2017-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN107513536A | 公开（公告）日： | 2017-12-26 |
| 发明（设计）人： | 欧卫军;沙海;花娟;王蕾;牛青青 | 申请（专利权）人： | 南通伊仕生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C07K14/16;C07K1/22 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司32243 | 代理人： | 吴惠松 |
| 地址： | 226001 江苏省南通市南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用真核表达系统制备HIV‑1gp120的方法，步骤如下利用大肠杆菌体外表达系统，获得pFastBac‑Ysgp3质粒；利用上述灭活质粒转染昆虫sf9细胞，待细胞病变后收集P1代病毒上清；利用P1代病毒上清再次感染昆虫sf9细胞，获得P2代病毒上清；重复C步骤，依次获得P3、P4代病毒上清；用P4代病毒上清感染昆虫sf9细胞，在gp120表达量出现峰值的时候收集细胞，获得gp120蛋白；纯化gp120蛋白；本发明具有以下优点通过基因重组的方法获得gp120的重组抗原，该重组抗原编码基因能够在昆虫细胞中表达，解决了现有HIV‑1检测试剂研发过程中存在的无法获得高纯度、高灵敏度的gp120抗原的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 表达 系统 制备 hiv gp120 方法 | ||
【主权项】：
一种利用真核表达系统制备HIV‑1gp120的方法，其特征在于：步骤如下：A、利用大肠杆菌体外表达系统，获得pFastBac‑Ysgp3质粒；B、利用上述灭活质粒转染昆虫sf9细胞，待细胞病变后收集P1代病毒上清；C、利用P1代病毒上清再次感染昆虫sf9细胞，获得P2代病毒上清；D、重复C步骤，依次获得P3、P4代病毒上清；E、用P4代病毒上清感染昆虫sf9细胞，在gp120表达量出现峰值的时候收集细胞，获得gp120蛋白；F、纯化gp120蛋白。
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