[发明专利]一种肝素钠的提取方法

摘要

本发明公开了一种肝素钠的提取方法。该方法包括以下步骤(1)收集小肠；(2)向小肠黏膜中加水，搅拌分散；(3)酶解；(4)预处理树脂；(5)吸附；(6)洗脱，再酶解；(7)纯化。本发明方法可有效提升制得的肝素钠的收率和纯度。

主权项

一种肝素钠的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集新鲜猪小肠黏膜，于0～4℃保存备用；(2)向小肠黏膜中加入为其重量4～5倍的水，升温至60～65℃，并在升温的同时搅拌分散，保温20～30min，再降温至30～45℃；(3)向步骤(2)所得的小肠黏膜溶液中加入0.4～0.8％小肠黏膜重量的复合蛋白酶，调节溶液pH值为8.5～9，于40～45℃下酶解3～4h，过滤，收集酶解液Ⅰ和滤渣；以滤渣为底物，重复上述酶解操作，离心，收集酶解液Ⅱ，将酶解液Ⅰ和酶解液Ⅱ合并；(4)用2～3倍树脂重量的20％～25％氯化钠溶液浸泡树脂，并搅拌2～3h，再分别使用0.5～1.5倍树脂重量的10％氯化钠溶液和5％氯化钠溶液洗脱树脂，每次1～2h；(5)向合并后的酶解液中加入氯化钠溶液，搅拌混合5～10min，于60～70℃保温10～20min，再加入步骤(4)中处理后的树脂，于室温下搅拌吸附4～6h，搅拌速度为50～100r/min，过滤，分别收集滤液和树脂；并向滤液中加入为其体积6％～8％的氯化钠溶液，再加入过量90％乙醇沉淀，收集并干燥析出物Ⅰ；其中，酶解液与树脂的体积重量比V:M＝12～15；氯化钠溶液体积占酶解液体积的1％～4％；所述氯化钠溶液浓度为0.5～1mol/L；(6)向树脂中加入1～2倍树脂重量的氯化钠溶液洗脱2～3次，每次3～5h，合并洗脱液，再加入0.4％的胰蛋白酶酶解2～3h，然后等体积95％乙醇沉淀，收集并干燥析出物Ⅱ；(7)将析出物Ⅰ和析出物Ⅱ混合，加水溶解，再分别加入0.1％混合物重量的过氧化氢和4％～8％混合物重量的单宁酸，搅拌混合，放置5～10min，过滤，然后向滤液中加入等体积的90％乙醇沉淀，收集并干燥析出物，得肝素钠纯品。