[发明专利]特异性人EWS‑FLI1融合蛋白抗体的制备方法及在制备尤文肉瘤诊断抗体试剂的应用

摘要

特异性人EWS‑FLI1融合蛋白抗体的制备方法及在制备尤文肉瘤诊断抗体试剂的应用1）多肽设计两组每组三条，组1多肽1Cys‑SSSYGQQNPSYDSVR；多肽2SSSYGQQ‑Cys；多肽3Cys‑PSYDSVR；组2多肽4Cys‑SSSYGQQSSLLAYN；多肽5同多肽2；多肽6Cys‑SSLLAYN；2）多肽合成；3）抗原制备将多肽1、4与KLH偶联，偶联物作为抗原用于免疫动物；4）免疫；5）抗体纯化抗体经三步多肽层析柱亲和纯化得到特异性抗体；6）浓缩；7）抗体鉴定证明目标抗体特异性。本发明能够实现规模化工业生产，所制备的抗体在尤文肉瘤诊断中应用。

主权项

一种特异性人EWS‑FLI1融合蛋白抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：多肽设计， 设计两组多肽序列，每组共三条，分别为：组1：多肽1：Cys‑SSSYGQQNPSYDSVR；多肽2：SSSYGQQ‑Cys；多肽3：Cys‑PSYDSVR；组2：多肽4：Cys‑SSSYGQQSSLLAYN；多肽5：同多肽2；多肽6：Cys‑SSLLAYN；多肽合成：多肽纯度≥70%；抗原制备：将多肽1与多肽4分别与KLH偶联，偶联物作为抗原用于免疫动物；KLH使用琥珀酰亚胺基4‑[N‑马来酰亚胺甲基]环己烷‑1‑羧化物双功能偶联剂预先活化成KLH‑SMCC，通过半胱氨酸与多肽1相联接；免疫：选用新西兰兔，每只兔子以300μg剂量进行基础免疫，以后每隔21天进行一次加强免疫，在经过三次加强免疫后，再经7天，取血样，对血清进行ELISA检测；收集经ELISA检测阳性的兔子血清；抗体纯化；浓缩：将纯化好的穿透液浓缩成特定浓度目标抗体浓液，1mg/ml以上；7）抗体鉴定：制备的目标抗体经过酶联免疫法、斑点杂交法法鉴定，证明组1目标抗体只对多肽1有特异反应，对其它多肽均无反应；组2目标抗体只对多肽4有特异反应，对其它多肽均无反应。