[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9技术的Glrx1基因敲除动物模型的构建方法有效
| 申请号： | 201710390894.3 | 申请日： | 2017-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN107287245B | 公开（公告）日： | 2020-03-17 |
| 发明（设计）人： | 李春保;邹小雨;周光宏;石学彬;徐幸莲 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9技术的Glrx1基因敲除动物模型的构建方法。包括以下步骤：一、靶向小鼠Glrx1基因的gRNA的选择和设计。二、sgRNA载体构建。三、sgRNA体外转录。四、小鼠一细胞期受精卵注射。五、F0代小鼠出生和鉴定。六、阳性F0代小鼠配繁，F1代小鼠出生与鉴定。通过本发明方法，能够成功获得Glrx1基因敲除动物模型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas9 技术 glrx1 基因 动物 模型 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基于CRISPR/Cas9技术的Glrx1基因敲除动物模型的构建方法，其特征在于包含以下步骤：步骤一：靶向小鼠Glrx1基因的sgRNA的选择和设计在Glrx1内含子相应位置设计相应的sgRNA，其引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；步骤二：sgRNA载体构建首先BsaI酶切pUC57‑sgRNA载体，37℃水浴1h后，1％的琼脂糖电泳，回收酶切产物；然后将sgRNA引物进行退火；最后，连接退火产物与回收的酶切产物，转化大肠杆菌，挑选单克隆进行PCR、PCR结果呈阳性送测序验证，得到正确的sgRNA载体；步骤三：采用转录试剂盒，体外转录sgRNA和Cas9mRNA，转录好的sgRNA备用；步骤四：Cas9mRNA和sgRNA组成的Cas9sgRNA体系的受精卵显微注射，其中，Cas9表达质粒为cas9D10A(plasmid#42335)，Addgene；步骤五：F0代小鼠出生与鉴定；步骤六：F0小鼠性成熟配繁，F1代小鼠鉴定。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京农业大学，未经南京农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710390894.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
