[发明专利]一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法在审
申请号: | 201710413737.X | 申请日: | 2017-06-05 |
公开(公告)号: | CN107142272A | 公开(公告)日: | 2017-09-08 |
发明(设计)人: | 黄小罗;方惠敏;张丽华;柳振宇 | 申请(专利权)人: | 南京金斯瑞生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/55 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司32218 | 代理人: | 夏平,李晓峰 |
地址: | 211100 江苏省南京*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法。本发明设计开发的质粒调控方法基于Crispr/Cas9系统;其利用表达的dCas9蛋白以及转录的针对于质粒复制区靶序列的gRNA,有效的实现了质粒复制的调控抑制,该方法尚未见其它文献和专利报道,是一种全新的方法。该方法中使用的针对复制区的靶序列,可以有多种选择,保证了利用不同的dCas9/gRNA对,实现不同程度的质粒复制调控的目的。该方法能够有效的降低质粒复制后产量2‑34倍,相比以前专利报道的方法,具有调控范围更广,调控能力更强的特点。总之,该方法设计新颖,能够有效实现对质粒复制不同程度的调控。 | ||
搜索关键词: | 一种 控制 大肠杆菌 质粒 复制 方法 | ||
【主权项】:
一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法,其特征在于:包括如下步骤:步骤1:在被调控质粒R的复制起始区,选择一段20bp的靶序列N20,其中靶序列的3’端相邻的序列为NGG;步骤2:在大肠杆菌细胞内表达一个Cas9蛋白的失活突变体dCas9蛋白以及转录出针对被调控质粒R复制起始区靶序列N20的gRNA。
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