[发明专利]抗癌、抗炎多肽Lunasin在哺乳动物细胞CHO-S中的表达、纯化方法

摘要

本发明公开了抗癌、抗炎多肽Lunasin在哺乳动物细胞CHO‑S中的表达、纯化方法。Lunasin多肽在哺乳动物细胞中的表达、纯化方法，包含如下步骤：(1)体外化学合成Lunasin基因；(2)PCR扩增Lunasin基因；(3)真核细胞表达载体的改造；(4)将Lunasin基因连接到改造后的哺乳动物细胞表达载体pZWCT1上；(5)阳性克隆的鉴定；(6)表达载体质粒瞬时转染哺乳动物细胞CHO‑S；(7)高密度细胞培养生产Lunasin多肽；(8)Lunasin多肽的分离纯化。本发明使Lunasin多肽的规模化生产成为可能，成本低、产量高，蛋白修饰准确，而且蛋白纯化方便简单。

主权项

Lunasin多肽在哺乳动物细胞中的表达、纯化方法，其特征在于包含如下步骤：(1)体外化学合成Lunasin基因；(2)以体外化学合成的Lunasin基因为模板，设计含有特异性酶切位点的引物，PCR扩增Lunasin基因；(3)真核细胞表达载体的改造：以哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1为骨架，在多克隆位点中分别加入引导表达蛋白质分泌的小鼠的IL2信号肽基因序列，用于纯化目的蛋白质的6个连续的编码组氨酸的基因序列，以及用以增加蛋白质表达量的强启动子WPRE基因序列，将改造后的表达载体命名为pZWCT1；(4)通过双酶切和T4 DNA连接酶方法将Lunasin基因连接到改造后的哺乳动物细胞表达载体pZWCT1上；(5)阳性克隆的鉴定；(6)表达载体质粒瞬时转染哺乳动物细胞CHO‑S；(7)高密度培养生产Lunasin多肽；(8)Lunasin多肽的分离纯化。