[发明专利]干细胞外泌体的分离方法有效
| 申请号： | 201710447410.4 | 申请日： | 2017-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN107236701B | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 金银鹏;傅青春;李洪超;王俊怡;王皙;张苗;孟玲玉;王晓今;陈成伟 | 申请（专利权）人： | 金银鹏;傅青春 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京酷爱智慧知识产权代理有限公司 11514 | 代理人： | 安娜 |
| 地址： | 200235 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种干细胞外泌体的分离方法，包括如下步骤：采用含血清培养基培养干细胞至细胞密度大于70％，收集干细胞，然后采用不含血清培养基继续培养；收集得到的产物中的培养基，然后过滤，收集滤液；将滤液加入第一浓缩管，离心，得到浓缩液；将浓缩液分装于第二浓缩管，离心；在第二浓缩管中加入缓冲液，再次离心；将再次离心后的第二浓缩管的内管倒置于收集管中，离心，收集管中的液体为含高浓度干细胞外泌体的溶液。本发明提供的干细胞外泌体的分离方法，通过联合运用大小不同的浓缩管，可以实现快速、高效、廉价地提取培养基中的外泌体；并且离心时间较短，可有效减少外泌体的机械性损伤，更好地保留外泌体的活性。 | ||
| 搜索关键词： | 干细胞 外泌体 分离 方法 | ||
【主权项】：
1.一种干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：采用含血清培养基培养干细胞至细胞密度大于70％，收集干细胞，然后采用不含血清培养基对所述干细胞继续培养；S2：除去所述S1得到的培养体系中的干细胞，然后将剩余组分过滤，收集滤液；S3：将所述滤液加入第一浓缩管，离心，得到浓缩液；所述第一浓缩管为15mL10KD浓缩管；所述离心条件为：4℃，3500～4500g离心35～45min；S4：将所述浓缩液分装于第二浓缩管，离心；然后在所述第二浓缩管中加入缓冲液，再次离心；所述第二浓缩管为0.5mL10KD浓缩管；所述离心和所述再次离心的条件均为：常温，15000g离心8～12min；S5：将所述再次离心后的第二浓缩管的内管倒置于收集管中，离心，所述收集管中的液体为含高浓度干细胞外泌体的溶液；其中，所述离心条件为：常温，900～1100g离心1.5～2.5min。
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