[发明专利]虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法

摘要

本发明公开了一种虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，包括如下步骤：1)、虾夷扇贝样品前处理，得样品液；2)、HLB/PDMS涂层搅拌棒的制备；3)、搅拌棒吸附萃取：先将HLB/PDMS涂层搅拌棒在甲醇中浸泡，然后置入5～10mL的样品液中，加酸调整pH值为3～7后进行富集；然后取出HLB/PDMS涂层搅拌棒放入乙腈中进行MCs解吸附，所得到的解吸附溶液用于液相色谱‑质谱分析；从而获得解吸附溶液中7种微囊藻毒素的浓度，最终获得虾夷扇贝样品7种微囊藻毒素的浓度。

主权项

1.虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征是包括如下步骤：1)、虾夷扇贝样品前处理：①、取1g待测虾夷扇贝肉进行匀浆；②、在浆液中加入10～20mL甲醇后于80±5℃超声提取20～30min；③、将超声提取所得物离心，取出上层清液；④、以离心所得的沉淀替代步骤②中的浆液重复上述步骤②～步骤③的超声提取和离心；⑤、将所有的上层清液合并后用氮气吹干，然后用5～10mL水复溶，得样品液；2)、HLB/PDMS涂层搅拌棒的制备：①、将搅拌棒清洗后烘干；②、配制PDMS溶胶：将100±5μL聚二甲基硅氧烷、100±5μL甲基三甲氧基硅烷、10±1μL聚甲基氢硅氧烷和100±5μL 95％三氟乙酸混合，得PDMS溶胶；95％三氟乙酸为由95％三氟乙酸和5％水混合而得，％为体积％；③将步骤①所得的烘干搅拌棒浸入步骤②所得的PDMS溶胶，取出后在搅拌棒的表面裹上HLB微粒，然后于60～80℃干燥24～30h，得HLB/PDMS涂层搅拌棒；3)、搅拌棒吸附萃取：先将HLB/PDMS涂层搅拌棒在甲醇中浸泡20～30min，然后置入5～10mL的步骤1)所得的样品液中，加酸调整pH值为3～7，以600～1000rpm富集60～120min；然后取出HLB/PDMS涂层搅拌棒放入含有100±20μL乙腈的离心管中超声10～20min，使样品中的MCs解吸附，所得到的解吸附溶液用于液相色谱‑质谱分析；4)、液相色谱‑质谱条件：色谱柱：2.1mm×150mm、3.5μm的Waters XSelect HSS T3，流动相：A为含0.1％甲酸的乙腈溶液，B为含0.1％甲酸的水溶液；梯度洗脱程序：0～1min，75％B；1～5min，75％～5％B；5～9min，5％B；9～10min，5％～75％B；10～16min，75％B；上述％均为体积％；柱温40℃，流速0.30mL/min，进样量10μL；离子源为电喷雾离子源，正源模式，离子源温度500℃，电喷雾电压5.5kV，雾化气(GS1)压力45psi，辅助气(GS2)压力65psi，气帘气(CUR)压力30psi，扫描方式为多反应监测(MRM)模式；7种微囊藻毒素的质谱参数见下表；7种微囊藻毒素的质谱参数从而获得步骤3)所得的解吸附溶液中7种微囊藻毒素的浓度，最终获得虾夷扇贝样品7种微囊藻毒素的浓度。