[发明专利]一种防收缩的人工真皮构建方法

摘要

本发明公开了一种防收缩的人工真皮构建方法，将已去除脂肪和结缔组织的皮肤组织进行消化培养，取第5~7代细胞用于真皮构建；将其不同的密度分两次接种在胶原溶液中，下层凝固后再接种上层，上层接种密度大于下层接种密度，最后放入培养箱中培养，得到人工真皮。本发明差异化接种的方式，上层细胞密度相对较大，可以满足检测需要的细胞数目；下层密度相对较小，可以减少细胞生长过程中对胶原基质的利用，从而减少下层真皮收缩。

主权项

一种防收缩的人工真皮构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：成纤维细胞的分离培养将已去除脂肪和结缔组织的皮肤组织进行消化培养，取第5~7代细胞用于真皮构建；步骤二：胶原支架的制备将胶原完全溶解于酸溶液中，将胶原溶解液、新生牛血清和DEME混匀，并调PH至7.2～7.4，得胶原溶液；步骤三：真皮层的接种取步骤一的成纤维细胞与步骤二中配置好的胶原溶液混匀，形成密度为6×105～9×105 cells/mL的细胞胶原混合液I；另取步骤一的成纤维细胞与步骤二中配置好的胶原溶液混匀，形成密度为2×105～3×105cells/mL的细胞胶原混合液II；将30~50μL的细胞胶原混合液II加入到Transwell小室中，待细胞胶原混合液II凝固后，将100~150μL的细胞胶原混合液I加入到混合液II表面；步骤四：人工真皮的培养待混合液I凝固后，将Transwell小室放入培养皿中，在Transwell小室内外均加入培养液，放入含4.5%‑5.5% CO2、37±1℃培养箱中培养，得到所述人工真皮。