[发明专利]一种基于自然转化的拟态弧菌高效遗传重组方法及应用有效
| 申请号： | 201710470525.5 | 申请日： | 2017-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN107058393B | 公开（公告）日： | 2021-01-08 |
| 发明（设计）人： | 耿毅;余泽辉;邓钊宾;汪开毓;陈德芳;欧阳萍;黄小丽;杨泽晓 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N1/21;C12R1/63 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 611130 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于自然转化的拟态弧菌高效遗传重组方法及应用，该方法以拟态弧菌SCCF01株基因组为模板，使用目的基因上臂和目的基因下臂引物对扩增目的基因上臂序列和下臂序列；并扩增卡那霉素抗性基因片段；将扩增得到的卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段进行融合，得到含有卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段的融合PCR产物；将获得融合PCR产物与受体拟态弧菌SCCF01株进行自然转化，经过对抗性标记基因的筛选，获得拟态弧菌SCCF01株的缺失株。本发明操作过程相较于自杀质粒介导的基因重组技术和λ‑RED重组技术，无需电转质粒或打靶DNA，操作简单。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 自然 转化 拟态 弧菌 高效 遗传 重组 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种基于自然转化的拟态弧菌高效遗传重组方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以拟态弧菌SCCF01株基因组为模板，使用目的基因上臂和目的基因下臂引物对扩增目的基因上臂序列和下臂序列；以PKD4质粒为模板，使用Kan引物对扩增卡那霉素抗性基因片段；2)将扩增得到的卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段进行融合，得到含有卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段的融合PCR产物；3)将步骤2)获得融合PCR产物与受体拟态弧菌SCCF01株进行自然转化，经过对抗性标记基因的筛选，获得拟态弧菌SCCF01株的缺失株。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于四川农业大学，未经四川农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710470525.5/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种气动注射器的细胞抽核方法
- 下一篇：一种通过发酵制备桦褐孔菌黑色素的方法
