[发明专利]一种检测肺癌相关基因热点突变的试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种检测肺癌相关基因热点突变的试剂盒及其应用。本发明保护引物对组(序列1至序列28)和记载有“检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法”的可读性载体在制备用于检测肺癌相关基因突变的试剂盒中的应用。本发明以血浆作为检测样本，并且针对肺癌相关基因(ALK基因、BRAF基因、EGFR基因和KRAS基因)设计14对特异性引物，再结合高通量测序的检测方法提高了检测数据量和实验结果准确性，可准确有效地监测肺癌相关基因的突变，该检测方法的灵敏度在0.05％。

主权项

引物对组和/或记载有“检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法”的可读性载体在制备用于检测肺癌相关基因突变的试剂盒中的应用；所述肺癌相关基因为ALK基因、BRAF基因、EGFR基因和KRAS基因；所述引物对组由(1)‑(4)所示的特异于ALK基因的4个引物对、(5)所示的特异于BRAF基因的1个引物对、(6)‑(12)所示的特异于EGFR基因的7个引物对和(13)‑(14)所示的特异于KRAS基因的2个引物对组成；(1)由序列表中序列1和序列2所示的两个单链DNA组成的引物对1；(2)由序列表中序列3和序列4所示的两个单链DNA组成的引物对2；(3)由序列表中序列5和序列6所示的两个单链DNA组成的引物对3；(4)由序列表中序列7和序列8所示的两个单链DNA组成的引物对4；(5)由序列表中序列9和序列10所示的两个单链DNA组成的引物对5；(6)由序列表中序列11和序列12所示的两个单链DNA组成的引物对6；(7)由序列表中序列13和序列14所示的两个单链DNA组成的引物对7；(8)由序列表中序列15和序列16所示的两个单链DNA组成的引物对8；(9)由序列表中序列17和序列18所示的两个单链DNA组成的引物对9；(10)由序列表中序列19和序列20所示的两个单链DNA组成的引物对10；(11)由序列表中序列21和序列22所示的两个单链DNA组成的引物对11；(12)由序列表中序列23和序列24所示的两个单链DNA组成的引物对12；(13)由序列表中序列25和序列26所示的两个单链DNA组成的引物对13；(14)由序列表中序列27和序列28所示的两个单链DNA组成的引物对14；所述检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法，包括如下步骤：(a)从待测者的血浆样本中提取游离核酸为模板，以所述引物对组中的各引物进行PCR扩增，得到扩增产物；(b)对所述扩增产物进行磁珠纯化回收，得到回收产物1；(c)对所述回收产物1进行PCR富集，得到富集产物；(d)对所述富集产物进行磁珠纯化回收，得到回收产物2；(e)对所述回收产物2进行高通量测序，根据测序结果确定所述待测者的肺癌相关基因是否发生突变。