[发明专利]用于测定生物材料中目标序列甲基化率的方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201710522272.1 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN109207618B | 公开（公告）日： | 2020-05-29 |
| 发明（设计）人： | 谢家建;彭于发 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 向群 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： |
本发明“用于测定待测生物材料中目标序列甲基化率的方法”，属于生物技术领域。所述方法包括：(1)用内切酶酶切处理所述待测生物材料的基因组DNA；(2)用目标序列的特异性引物对步骤(1)所得到的酶切产物进行荧光定量PCR扩增，获得酶切后的待测生物材料目标序列的Ct值：Ct |
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| 搜索关键词： | 用于 测定 生物 材料 目标 序列 甲基化 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.用于测定待测生物材料中目标序列甲基化率的方法，其特征在于，包括：(1)用内切酶酶切处理所述待测生物材料的基因组DNA；所述内切酶对CpG甲基化敏感，且所述目标序列上分布有所述内切酶的切割位点序列；经所述酶切处理后得到的酶切产物为包含有酶切后的目标序列的待测生物材料的基因组DNA；(2)用目标序列的特异性引物对步骤(1)所得到的酶切产物进行荧光定量PCR扩增，获得酶切后的待测生物材料目标序列的Ct值：Ctm；所述目标序列的特异性引物基于含有所述内切酶切割位点序列的目标序列设计而得，且其上下游引物之间的扩增片段区域覆盖所述内切酶切割位点序列；(3)用所述目标序列的特异性引物对未经所述内切酶酶切的待测转基因植物的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增，获得对照处理的所述待测生物材料目标序列的Ct值：Ctk；(4)计算待测生物材料的目标序列甲基化率：M；M＝2‑ΔCtm；其中，ΔCtm＝Ctm‑Ctk。
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