[发明专利]一种家蚕浆细胞特异性分子标记鉴定方法

摘要

本发明属于生物学领域，公开了一种能够特异性识别家蚕浆细胞多克隆抗体的鉴定方法，利用该成果，可以准确判断细胞类型；利用转录组分析，共筛选获得139个颗粒细胞和141个浆细胞特异性表达候选基因；利用荧光定量PCR，对转录组结果进行验证；发现Integrinβ2和Integrinβ3特异性地高表达于浆细胞。成功鉴定克隆候选基因，经原核表达和蛋白纯化获得相应抗原后免疫动物制备抗体；免疫荧光结果表明Integrinβ2和Integrinβ3特异标记浆细胞。

主权项

一种家蚕浆细胞特异性分子标记鉴定方法，其特征在于，所述家蚕浆细胞特异性分子标记鉴定方法包括：步骤一，通过对家蚕细胞的转录组生物信息学数据分析，共筛选获得浆细胞特异性性表达的候选基因；步骤二，通过实时荧光定量PCR对基因在mRNA水平上验证，筛选出家蚕基因Integrinβ2和Integrinβ3在浆细胞里特异性地高表达；步骤三，采用家蚕基因Integrinβ2和Integrinβ3特有的引物序列，经过PCR技术对这两个基因的序列进行克隆扩增，并将所得的扩增产物进行测序验证；步骤四，采用家蚕基因Integrinβ2和Integrinβ3特有的RACE引物序列，利用RACE扩增技术获得其cDNA全长序列；步骤五，根据cDNA全长序列，进行家蚕基因Integrinβ2和Integrinβ3的原核表达及蛋白纯化，并制备获得抗体；步骤六，利用所获得Integrinβ2和Integrinβ3的抗体在家蚕细胞水平，以及转基因家蚕个体水平等验证，确定Integrinβ2和Integrinβ3能特异性地标记家蚕循环血细胞中的浆细胞。