[发明专利]干血斑中7种类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法

摘要

本发明属于血液检测技术领域，具体涉及一种干血斑中7种类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，所述的7种类固醇激素分别为：17‑羟基孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、孕酮、皮质醇、11‑脱氧可的松和醛固酮。该方法检测经过预处理的干血斑中上述7种类固醇激素，样品经甲醇沉淀蛋白，并超声提取，提取后过滤净化，以甲醇和水作为流动相，经C18色谱柱进行梯度分离，目标化合物在电喷雾正、负离子模式下电离，采用多反应监测扫描模式，内标定量法分析。本发明方法灵敏度高、特异性强、准确性好，分析时间短，精密度及加标回收率满足检测要求。

主权项

干血斑中7种类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述的7种类固醇激素分别为：17‑羟基孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、孕酮、皮质醇、11‑脱氧可的松和醛固酮；所述的检测方法包括如下步骤：(1) 血斑样本前处理：用3/16打孔器打4个血斑到12*75mm的玻璃试管中，加入含有4种内标物质的内标萃取液200μL，超声60min提取，置于高速离心机5000r/min涡旋15min，得到提取液，将提取液转入带有滤膜的96孔板中，离心后置于氮气吹仪中55℃吹干、然后加入100μL 50%的甲醇溶液复溶，覆盖铝箔；放入涡旋振荡器中以750rpm的速度涡旋震荡15min，进行上机检测；（2）采用液相色谱串联质谱法检测经上述步骤处理的样本，利用液相色谱进行梯度分离，目标化合物在电喷雾正、负离子模式下电离，采用多反应监测扫描模式，再采用同位素内标定量法分析,利用分析软件以标准物与内标物的浓度比为X轴,标准物与内标物峰面积比为Y轴,建立校准曲线,并计算出干血斑中7种类固醇激素的含量，得到检测结果；所述液相色谱条件如下：流动相A为水溶液，流动相B为纯甲醇溶液，柱温40℃，检测时间10min，采用梯度洗脱方式，程序为0.01‑0.5 min 45% B，0.5‑2.0min 45%‑55%B，2.0‑4.0 min 55%‑90% B，4.0‑6.0 min 90% B，6.0‑6.1min 90%‑45%B；进样量10μL；流速0.35mL/min；柱温40℃；色谱柱：Shimadzu‑Packed XR‑ODSⅡ，2mm×75mm×2.2μm；所述质谱条件如下：电喷雾电离源，多反应监测模式正、负离子模式，电喷雾电压为±5500V，离子源温度为 400℃，各个目标化合物的其它质谱参数锥孔电压DP、碰撞能量CE、碰撞室出口电压CXP如下表所示：。