[发明专利]蜂蜜快速检测试纸条的制备方法及其试纸条与应用

摘要

本发明公开了一种蜂蜜快速检测试纸条的制备方法及其试纸条与应用。制备方法包括（1）能够特异性识别MRJP1蛋白的多克隆抗体SP‑1和SP‑2的制备和纯化；（2）胶体金溶液的制备；（3）硝酸纤维素膜上包被质控线（C线）和检测线（T线）；（4）以蜜蜂内源性蛋白MRJP1为标志物的蜂蜜双抗体夹心快速检测试纸条的组装；（5）蜂蜜检测样品的准备。从蜂蜜样品中分离纯化的蛋白与该金标试纸条反应后，根据T线是否显色可以判别蜂蜜样品的真伪。本发明的蜂蜜双抗体金标试纸条适用于人造糖浆冒充的假蜂蜜的检测，为蜂蜜质量及掺假检测提供了一种非常可靠的快速检测新方法。

主权项

一种蜂蜜快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤如下：1）针对MRJP1的多克隆抗体SP‑1和SP‑2的制备和纯化：1.1通过对MRJPs蛋白家族氨基酸序列作同源性分析，筛选出MRJP1不同于其他家族成员的氨基酸序列：分别位于MRJP1第56‑70位的寡肽1‑SGEYDYKNNYPSDID，第360‑372位的寡肽2‑ IKEALPHVPIFD，即分别为抗体SP‑1和SP‑2所对应的抗原多肽；1.2根据寡肽1和寡肽2的氨基酸序列，进行化学合成，将多肽与KLH偶联，作为免疫抗原；1.3分别将2个免疫抗原与缓冲液和佐剂混合，在第1d、15d、29d、43d分别多点注射新西兰大白兔2只；1.4第53 d，颈动脉取血，收集血清，通过抗原亲和柱纯化、透析，分别得到MRJP1的特异性抗体SP1和SP2；2）胶体金溶液的制备：取氯金酸水溶液制备成含有粒径为20‑40 nm的胶体金颗粒的胶体金溶液；3）胶体金标记抗体：取SP‑1抗体加入到胶体金溶液中，制备成免疫胶体金溶；4）在硝酸纤维素膜上包被C线和T线，其中C线为质控线，包被商用羊抗兔lgG，T线为检测线，包被上述步骤1）制得的SP‑2抗体；用划膜机点在硝酸纤维素膜上即得C线和T线，使C线和T线相距5 mm；室温晾干，得到包被后的硝酸纤维素膜；5）胶体金免疫层析快速检测试纸条的组装：将样品垫、上述步骤4）所得包被后的硝酸纤维素膜和吸水垫一次粘贴到聚氯乙烯（PVC）底板上，切割成2~3 mm宽的条状，即得快速检测试纸条；4℃避光干燥保存。