[发明专利]一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法有效
| 申请号： | 201710547595.6 | 申请日： | 2017-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN107267549B | 公开（公告）日： | 2021-01-05 |
| 发明（设计）人： | 宣磊;华建峰;王莦丰;王芝权;杨颖;於朝广;范文才;殷云龙 | 申请（专利权）人： | 江苏省中国科学院植物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N5/04 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210000 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法，包括：1）以中山杉生长30天长势良好的组培苗幼嫩叶片为材料，对材料进行30h的黑暗预处理；2）对叶肉原生质体进行分离和纯化；3）从15~20mL过夜培养菌液抽提50~80μg质粒，质粒为载体p2FGW7.0；4）PEG介导进行原生质体转化。本发明的中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法，其操作简单易行，除可以获得大量、完整、纯净的中山杉叶肉原生质体外，还可以达到高达80%的质粒转化率。从而解决了无法深入研究中山杉基因功能的难题，也为其他针叶树种原生质体瞬时表达体系建立提供一定的参考及借鉴，将在林木基因工程领域有重要的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 中山 品种 406 叶肉 原生 质体 分离 纯化 高效 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以中山杉生长30天长势良好的组培苗幼嫩叶片为材料，对材料进行30h的黑暗预处理；2）对叶肉原生质体进行分离和纯化；3）从15~20mL过夜培养菌液抽提50~80μg质粒，质粒为载体p2FGW7.0；4）PEG介导进行原生质体转化。
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