[发明专利]一种敲除AAV受体的方法、敲除了AAV受体的HEK293细胞株及其应用有效
| 申请号： | 201710553164.0 | 申请日： | 2017-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN107245475B | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 李华鹏 | 申请（专利权）人： | 广州派真生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/90;C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州容大专利代理事务所(普通合伙) 44326 | 代理人： | 刘新年 |
| 地址： | 511370 广东省广州市高新技术*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程和细胞学领域，具体涉及一种AAV受体敲除方法、敲除AAV受体的HEK293细胞株及其应用；所述被敲除的AAV受体为KIAA0319L；所述敲除方法包括：构建靶向AAVR基因组序列的sgRNA载体；转染293T细胞，培养得到各克隆细胞；Surveyor基因突变分析试验；选出AAVR突变的单克隆；再选择出高产AAV的AAVR突变细胞株；鉴定其它潜在突变位点的突变情况；把无其它突变位点的细胞株再扩大，建库以备生产。本发明的被敲除的AAV受体的HEK293细胞株生产AAV的最终产量比常规HEK293产量高出约50％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 aav 受体 方法 除了 hek293 细胞株 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用敲除了AAV受体的HEK293细胞株制备AAV的方法，其特征在于，操作步骤包括：(1)铺敲除了AAV受体的HEK293细胞株至反应孔板中；(2)将pRC‑DJ载体、Ad辅助载体及AAV‑EGFP载体加入DMEM中，再加入PEI，马上混匀，培养；(3)培养72小时后收集细胞和上清，反复冻融三次，离心得上清即为AAV粗提液；其中，所述HEK293细胞株敲除的是KIAA0319L基因第4个外显子或第8个外显子。
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