[发明专利]一种制备B区缺失的成熟人凝血因子Ⅷ的方法在审
| 申请号： | 201710554321.X | 申请日： | 2017-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN107142278A | 公开（公告）日： | 2017-09-08 |
| 发明（设计）人： | 尹杰超;李德山;王文飞;袁清艳;郑琦;黄涛 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C07K14/755;A61K38/37;A61P7/04 |
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| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明属于生物制药领域，涉及人凝血因子Ⅷ重链FⅧH和轻链FⅧL基因表达载体的构建、哺乳动物细胞的转染、FⅧH和FⅧL高效表达细胞株的筛选和鉴定、B区缺失的成熟人凝血因子Ⅷ的制备、活性检定及在药学上的应用。本发明涉及一种新型B区缺失FⅧ因子的制备方法。通过人工合成方法获得适于在CHO细胞系中表达的重链FⅧH基因和轻链FⅧL基因。两者分别由CMV启动子启动，表达单元中含有增强表达的SV40Enhancer和Intron，引入GS基因和EGFP基因便于对高表达细胞株进行筛选克隆。将两个基因的表达产物混合以后，其混合物具备天然FⅧ因子的凝血活性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 缺失 成熟 凝血 因子 方法 | ||
【主权项】：
一种制备重组人凝血因子Ⅷ重链的表达载体，其特征在于：(1)、该载体包含人凝血因子Ⅷ重链基因——FⅧH(B区缺失)；(2)、人凝血因子Ⅷ重链基因FⅧH由hCMV‑MIE启动子控制；(3)、FⅧH基因表达单元含有增强其表达的相应调控元件SV40Enhancer和Intron；(4)、引入报告基因EGFP便于利用流式细胞仪筛选；(5)、载体的表达单元结构为如下核苷酸顺序：(SV40Enhancer)‑GS‑(rhCMV‑MIE)–(Kappa leader‑F ⅧH)‑(IRES‑EGFP)‑polyA‑Amp。
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