[发明专利]一种多功能载体的构建及使用方法有效
| 申请号： | 201710585288.7 | 申请日： | 2017-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN107326043B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 娜仁;杨春燕;张孟臣;刘兵强;赵青松;陈强 | 申请（专利权）人： | 河北省农林科学院粮油作物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;张立娜 |
| 地址： | 050035 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种多功能载体的构建及使用方法。该多功能载体含有DNA片段A(自5’端到3’端依次含attL1、IIs型限制性内切酶A的识别序列、筛选标签序列1、所述IIs型限制性内切酶A的识别序列、attL2)和DNA片段B(自5’端到3’端依次含T‑DNA右边界序列、ColE ori序列、筛选标签序列2、pSa ori序列、T‑DNA左边界序列)。该多功能载体采用Golden Gate法可将单个或多个片段“无逢”插入载体中，操作简单经济；由于载体尺寸小，既可通过农杆菌稳定转化植株，也可瞬时转化原生质；由于含attL序列，因此可将其作为入门载体把重组片段通过LR反应穿梭至目的载体，应用灵巧便捷。 | ||
| 搜索关键词： | 多功能载体 标签序列 筛选 稳定转化植株 右边界序列 左边界序列 多个片段 简单经济 入门载体 农杆菌 构建 转化 应用 | ||
【主权项】：
1.多功能载体，为含有DNA片段A和DNA片段B的环形载体；/n所述DNA片段A自5’端到3’端依次含有attL1序列、IIs型限制性内切酶A的识别序列、筛选标签序列1、所述IIs型限制性内切酶A的识别序列、attL2序列；/n所述DNA片段B自5’端到3’端依次含有T-DNA的右边界序列、大肠杆菌复制起点ColEori序列、筛选标签序列2、农杆菌复制起点pSa ori序列、T-DNA的左边界序列；/n所述筛选标签序列1为CmR-ccdB；所述CmR-ccdB为自5’端到3’端依次含有CmR和ccdB的DNA片段；所述CmR表示氯霉素抗性基因，所述ccdB表示ccdB致死基因；/n所述筛选标签序列2为壮观霉素抗性基因序列。/n
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