[发明专利]一种人源程序性死亡因子配体PD-L2蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及一种人源程序性死亡因子配体PD‑L2（hPD‑L2）蛋白的制备方法，属于重组蛋白的制备方法技术领域。本方法采用PCR技术对整个胞外区进行扩增，并与pET‑22b载体进行连接，构建融合表达重组质粒，转入原核表达系统RossetaTM(DE3)宿主菌诱导表达hPD‑L2蛋白，获得上清表达的hPD‑L2蛋白，然后利用Ni‑NTA柱亲和层析纯化，获得高纯度、高稳定性、构象均一的蛋白。本发明制备的hPD‑L2蛋白可作为抗原免疫Balb/c雌性小鼠，用于制备单克隆抗体。通过本发明制备的hPD‑L2蛋白具有流程简便、周期短、成本低、获得的蛋白纯度高与均一性高的特点。

主权项

一种人源程序性死亡因子配体PD‑L2蛋白的制备方法，其特征在于：a) 通过hPD‑L2基因的获取和克隆以及重组质粒pET‑22b‑hPD‑L2的构建；b) 制备RossetaTM (DE3)的感受态细胞，将a)获得的重组质粒转入该感受态细胞中，获得重组菌株；c) 在22 ℃、200 rpm、0.8 mM异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导b)获得的重组菌株8 h，获得hPD‑L2蛋白的大量表达；d) 采用Ni‑NTA柱亲和层析法纯化c)获得纯度较高的hPD‑L2重组蛋白；对纯化后的重组蛋白利用浓缩管进行浓缩，获得高浓度的hPD‑L2重组蛋白。