[发明专利]一种重组人源溶菌酶的层析方法在审
| 申请号： | 201710614064.4 | 申请日： | 2017-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN109295035A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 朱幼惠 | 申请（专利权）人： | 上海复华兴生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/36 | 分类号： | C12N9/36 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 201499 上海市奉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物大分子的分离纯化领域，涉及一种重组人源溶菌酶的层析方法。本发明还包括该层析方法特定的层析介质。基于溶菌酶具有抗菌、消炎、抗病毒等重要作用，本发明利用新型阴离子/疏水复合填料介质，通过对介质平衡液、洗脱液组合方式等介质和方法的优化，直接从酵母菌发酵液中分离纯化重组人源溶菌酶，分离纯化后得到的溶菌酶蛋白纯度和活力分别可以达到99.0％和70000u/mg以上。本发明较现有技术的重组人源溶菌酶的生产方式，具有处理速度快，处理量大，工作量小，成本低的优点，适合工厂化大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 人源溶菌酶 分离纯化 层析 酵母菌发酵液 溶菌酶蛋白 生物大分子 新型阴离子 层析介质 复合填料 介质平衡 组合方式 消炎 处理量 工厂化 抗病毒 溶菌酶 洗脱液 抗菌 疏水 工作量 优化 | ||
【主权项】：
1.一种重组人源溶菌酶的层析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)装柱：层析柱填充介质，并且预平衡；所述的层析采用的介质是阴离子/疏水复合填料介质；(2)上样：将经过离心收集的发酵液上清样品通过预平衡的层析柱；(3)清洗：采用10‑60mmol/L pH为5.4‑7.4的磷酸缓冲液清洗层析柱；其中，氯化钠的浓度低于0.3mol/L；(4)洗脱：用10‑60mol/L pH为5.4‑7.4的磷酸缓冲液将溶菌酶蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；其中，氯化钠的浓度范围是0.5‑3.0mol/L。
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