[发明专利]液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法

摘要

本发明公开了一种液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法，包括用提取液处理样本，该提取液由液相色谱的流动相组成，包括乙腈和缓冲液，乙腈的浓度为50％‑95％，缓冲液由浓度为0.1％‑0.3％的甲酸和浓度为1‑10mM的甲酸铵组成，或者由浓度为0.1％‑0.3％的乙酸和浓度为1‑10mM的乙酸铵组成，该提取液的pH在3‑5.5之间。本发明公开的方法可以对血液、尿及脑脊液等生物组织均匀样本进行直接检测，样本处理方法简单，样本用量少，可低至4μl，检测灵敏度高，可达pg/ml级，可检测的氨基酸浓度范围宽，基质干扰小，检测准确度高，能同时检测的氨基酸种类多达29种，且检测时间短。

主权项

1.液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法，其特征在于，包括：用提取液处理生物组织均匀样本；氨基酸标准品配制；其中，所述生物组织均匀样本包括血清、尿和脑脊液；所述用提取液处理生物组织均匀样本具体包括：(i)将样本放入‑80℃冰箱冷冻；(ii)将冷冻后的样本4‑6μL，按照样本与提取液的体积比4：991，与提取液混合；(iii)加入内标氘代苯丙氨酸，涡旋混合，内标氘代苯丙氨酸在最终待测样本溶液中的体积比为0.5％；(iv)12000rpm、4℃离心，取上清液，待测；所述氨基酸标准品配制包括：(a)血清样本氨基酸检测对L‑2‑氨基己二酸和叶酸，均用含0.1％甲酸的水溶液配制为100μg·mL^‑1的标准品母液；对其余氨基酸，用超纯水配制成1mg·mL^‑1的标准品母液；用提取液稀释标准品母液，配制混合标准品；(b)尿样本和脑脊液样本氨基酸检测对高半胱氨酸和L‑2氨基己二酸，用含0.1％甲酸的水溶液分别配制为100μg·mL^‑1、1mg·mL^‑1的标准品母液；对其余氨基酸，加超纯水分别配制成浓度为1mg·mL^‑1的标准品母液；用提取液稀释标准品母液，配制混合标准品；所述的提取液包括：乙腈，其浓度为85％；缓冲液，由浓度为0.1％的甲酸和浓度为1.7mM的甲酸铵组成；所述提取液的pH为4.32。