[发明专利]一种普通野生稻组织培养快繁方法

摘要

本发明涉及植物快繁技术领域，特别涉及一种普通野生稻组织培养快繁方法，所述方法包括如下步骤：水稻种子的选择与消毒；将种子接种到含海带提取物的培养基中培养获得无菌试管苗；将试管苗接种到含芦荟提取物的培养基中培养获得丛生芽；将丛生芽接种到含小麦胚芽提取物的培养基中培养获得健壮植株；将健壮植株移接至含小球藻提取物的培养基中培养获得带根的完整植株。与传统方法相比，本发明通过对快速繁殖各阶段的培养基进行优化，进一步提高了野生稻种子发芽率，促进丛生芽的繁殖和分化，增强了新生植株的生根能力，得到的新生苗长势好，株苗健壮，显著提高了野生水稻组织培养快繁的成功率。

主权项

1.一种普通野生稻组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1-2％的洗洁精水溶液浸泡5-15min，自来水冲洗10-20min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1-2min，再于含有2％活性氧的浓度为0.003-0.006％的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；/n(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于22-26℃下避光培养18-24天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和海带提取物0.3-0.5mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；/n(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于22-26℃下光照培养25-30天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.2-1.0mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、KT 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和芦荟提取物0.5-0.8mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；/n(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养30-40天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.2-0.4mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小麦胚芽提取物0.4-0.7mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；/n(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行15-25天的生根培养，培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L、AC 1.0-1.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小球藻提取物0.1-0.3mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；/n(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中；/n步骤(2)中，所述海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入10-20体积倍的水中进行胶体磨处理5-8min，70-80℃下水浴提取10-12h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取2-3次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入3-4体积倍的乙醇中沉淀20-24h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物；/n步骤(3)中，所述芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.6-0.9％的淀粉酶进行酶解处理1-2h，酶解后加入1-2体积倍的90-95％的乙醇中混匀，浸制20-25天，将浸制后的混合液于80-90℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物；/n步骤(4)中，所述小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入4-6重量倍的体积浓度为75-85％甲醇溶液中研磨30-40min，高速冷冻离心8-10min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物；/n步骤(5)中，所述小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入4-5体积倍的体积分数为80-90％的乙醇中回流提取2-4h，重复提取2-3次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入3-4体积倍的体积分数为60-70％的乙醇中静置12-24h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物。/n