[发明专利]口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法

摘要

本发明公开了口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，包括：先将口蹄疫病毒培养液离心至澄清，在无菌条件下加二氯甲烷，搅拌均匀，在低温下沉降，过夜，取上清液；过大、小孔径的中空纤维，然后层析，按照浓度为7‑10％的比例加入PEG，搅拌；静置；提取上清液并弃去，将沉淀后的抗原搅拌均匀，无菌下灌装至离心桶内，沉降离心；弃上清液，沉淀物用pH值为7.6±0.2的PBS缓冲液稀释，重悬；重悬液用分散机充分匀浆；纯化离心，收集上清液，上清液为纯化抗原；纯化抗原用0.22μm孔径滤器过滤除菌，然后用适量PBS液冲洗滤器和管路。本发明采用二氯甲烷浓缩纯化口蹄疫抗原，比传统的氯仿安全性更好，并且纯化后杂蛋白含量较低。采用二氯甲烷把较大的杂蛋白除去，中控纤维去除特定大小的蛋白颗粒，Sephawse 6FF层析、TOYOPEARL、TSKgel离子交换层析进一步去除特定大小蛋白进一步提高目标蛋白纯度，PEG只抓取目标物(口蹄疫抗原)，相当于再次除去杂蛋白结构，使得口蹄疫抗原浓缩纯化的效果更好。

主权项

口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：S101先将口蹄疫病毒培养液离心至澄清，在无菌条件下加二氯甲烷，搅拌均匀，在低温下沉降，过夜，取上清液；S102将上清液过第一中空纤维进行过滤，收集透过液；S103将透过液过第二中空纤维进行过滤，所述第二中空纤维的孔径比所述第一中空纤维的孔径小，收集回收液；S104将S103中收集的回收液进行层析；S105按照浓度为7‑15％的比例加入PEG，搅拌；S106停止搅拌后静置；S107提取上清液并弃去，将沉淀后的抗原搅拌均匀，在无菌条件下灌装至离心桶内，沉降离心；S108弃去上清液，沉淀物用pH值为7.6±0.2的PBS缓冲液稀释，重悬；S109重悬液用分散机充分匀浆；S110纯化离心，收集上清液，上清液为纯化抗原；S111纯化抗原用0.1μm或0.22μm孔径滤器过滤除菌。