[发明专利]一种抗生素替代品氧化酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤葡萄糖氧化酶天然产菌株的基因的选育、诱变基因的克隆、含葡萄糖氧化酶基因工程菌构建、葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理的步骤，建立了液态发酵工艺与膜分离技术和喷雾干燥技术相耦合葡萄糖氧化酶的生产工艺流程，并研究了耐温、pH范围宽、活力高的葡萄糖氧化酶高产菌株的选育及构建、产品的稳定性；本发明的方法提升酶制剂研发、生产方面的技术水平，促进酶制剂行业的发展，减少抗生素的使用或者部分替代抗生素，提高机体的免疫力并可促进机体生长，不会产生菌体抗药性或药物残留，具有高价值的经济效益和社会效益。

主权项

一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）葡萄糖氧化酶天然产菌株的基因的选育：利用微生物菌种选育技术和菌种定向选育技术，选育出葡萄糖氧化酶基因来源的野生型菌株，并在在YPD平板上进行筛选，取孢子制成孢子悬液，利用微生物菌种选育技术获得一株葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312；（2）诱变基因的克隆：将上述步骤（1）中筛选获得的葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312的DNA为模板，PCR扩增获取葡萄糖氧化酶基因，得到的重组表达载体命名为Gegod‑pPIC9K；（3）含葡萄糖氧化酶基因工程菌构建：将上述步骤（2）中重组表达载体Gegod‑pPIC9K采用BglⅡ进行线性化，线性化后的重组载体电击转化毕赤酵母GS115，电转化后涂布于含G418的YPD平板上进行筛选，筛选获得葡萄糖氧化酶发酵水平最高的工程菌Gegod‑pPIC9K‑GS115；（4）葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理：采用筛选获得的葡萄糖氧化酶重组菌株Gegod‑pPIC9K‑GS115进行高密度液体发酵培养，发酵结束后，发酵液可通过陶瓷膜或超滤膜进行后处理，复配载体进行喷雾干燥制得葡萄糖氧化酶成品。