[发明专利]一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体是一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法，其特征是：将烟草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织和不定芽在超净工作台内与正常组织分离开来，转移至空置的无菌组培瓶中，盖上瓶盖，置于光照培养箱（与正常组培条件一致）中进行饥饿处理1‑7天。待玻璃化组织恢复正常状态后，转移至分化培养基（愈伤组织）或伸长培养基（不定芽）中继续培养。应用本技术可以使烟草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织或不定芽去玻璃化，再经继代培养可以形成正常的再生植株。本发明的优点在于：采用了无培养基的空瓶饥饿培养方法，无需增加任何培养成分，也不需要增加其他专用设备，操作简便，效果显著。

主权项

1.一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1) 烟草玻璃化愈伤组织和不定芽处理：当正常培养的分化培养基上出现玻璃化的烟草愈伤组织或不定芽时，在超净台内将玻璃化部分与正常组织分离开来，如果玻璃化愈伤组织体积较大，应用无菌镊子分成适宜大小，并从培养基上取出，转移至灭菌的空置的干燥组培瓶内，密封瓶口；置于正常光照培养箱中1‑7天，直至玻璃化组织恢复正常状态，期间若组培瓶内水分过多，可以更换组培瓶；（2）处理后的愈伤组织及不定芽培养：将步骤（1）处理后恢复正常状态的烟草愈伤组织或不定芽在超净台内转移至分化培养基或伸长，培养基上继代培养，5‑8天后，原玻璃化烟草愈伤组织或不定芽即可正常分化或伸长；（3）如果经过步骤（2）培养处理的去玻璃化烟草愈伤组织和不定芽在继代培养过程再次出现玻璃化迹象，重复步骤（1）和（2）；所述正常光照培养箱的条件为：相对湿度60%，光照16 h/28 ℃，黑暗8 h/25℃，光强4 Lx；所述分化培养基成分：4.4g/L MS无机盐即Sigma的MS基础培养基，30g/L蔗糖，1.0 mg/L 6‑BA，0.1 mg/L NAA，2.5 g/L 植物凝胶，余量为水，pH 5.8‑5.9；所述伸长培养基成分：4.4g/L MS无机盐即Sigma的MS基础培养基，30g/L蔗糖，0.1 μg/mL 6‑BA，2.5 g/L 植物凝胶，余量为水，pH 5.8‑5.9。