[发明专利]采用大肠埃希氏菌JL-HYP发酵生产羟脯氨酸的方法

摘要

本发明涉及采用大肠埃希氏菌JL‑HYP发酵生产羟脯氨酸的方法，包括以下步骤，大肠埃希氏菌JL‑HYP菌株经斜面活化，再经梯度稀释，涂布于LB培养基上，培养后，挑取单个菌落分别接种到LB斜面培养基上，置于生化培养箱30‑36℃培养12h；从LB斜面培养基上挑取单个菌落接种到装有种子培养基的种子瓶中培养；将种子液接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行培养30‑45h，得到含有羟脯氨酸的发酵液；提取含有羟脯氨酸的发酵液中的羟脯氨酸；本发明该工艺发酵周期短，菌体密度高，羟脯氨酸的产量和得率高。本发明发酵周期短，菌体密度高，羟脯氨酸的产量和得率高。

主权项

采用大肠埃希氏菌JL‑HYP发酵生产羟脯氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、大肠埃希氏菌JL‑HYP菌株经斜面活化，生化培养箱37℃培养20h，再经梯度稀释，涂布于LB培养基上，培养后，挑取单个菌落分别接种到LB斜面培养基上，置于生化培养箱30‑36℃培养12h；从LB斜面培养基上挑取单个菌落接种到装有种子培养基的种子瓶中培养，培养条件：温度30‑36℃、摇床转速200rmp、培养时间6‑8 h；当OD值长到1.0‑2.0时，得到种子液，备用；步骤二、将种子液接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行培养30‑45h，得到含有羟脯氨酸的发酵液；接种量：5‑15%；培养条件：初始发酵温度32‑38℃，空气流量5‑50L/min和搅拌速度200‑800r/min使溶氧维持在10‑40%，发酵pH值控制在7.0‑7.2之间；步骤三、提取含有羟脯氨酸的发酵液中的羟脯氨酸：将发酵液加热到40‑60℃，用2mo1/L盐酸调节pH至2‑5，过30nm陶瓷膜微滤，纯化水清洗2‑3次；将上清液过强酸性阳离子交换柱，条件为：静态吸附，按20%体积比加入阳离子树脂，搅拌吸附1h；动态吸附，按15%体积装柱树脂，流速按2BV/h进料，末期用0.5‑1BV水冲柱；收集上清液；在上清液中按其体积0.5‑1%的量加入活性炭，60℃脱色0.5‑2h，过滤除炭；收集得到羟脯氨酸上清液进行真空浓缩，得到羟脯氨酸；所述大肠埃希氏菌JL‑HYP，分类命名为大肠埃希氏菌（Escherichia coli），已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），菌种保藏编号为CGMCC NO.13922，保藏日期为2017年3月23日。