[发明专利]一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法

摘要

本发明公开了一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，样品经超声辅助蛋白酶XIV提取，用高效液相色谱‑氢化物发生原子荧光光谱(HPLP‑HG‑AFS)联用技术测定。采用Hamilton PRP‑X100阴离子交换柱(250mm×4.1mm,10μm)，以5mmol/L(pH 4.5)的柠檬酸为流动相，在8min内可分离4种硒形态硒代胱氨酸(SeCys2)，甲基‑硒代半胱氨酸(MeSeCys)，亚硒酸盐(Se(Ⅳ))，硒代蛋氨酸(SeMet)。从而高效快速地提取出海洋中药中硒形态，从而保持样品形态和最初的一致性。经优化，选择实验条件，样品加标回收率范围为90.7％～104.5％，精密度小于5％。此方法前处理简单，灵敏度高，运行设备便宜，可满足海洋中药中硒形态的定量分析。

主权项

一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品的前处理1.1)将抗癌类海洋中药的样品置于超低温冰箱冷冻过夜，取出置于冷冻干燥机中以‑90℃低温干燥48h，用中药粉碎机粉碎，过100目筛，混合均匀，得到样品粉末，备用；1.2)准确称取1.0000g样品粉末于50mL离心管中，加入5～30mgmg蛋白酶XIV和10.0mL超纯水，旋涡混匀，加盖密封，37℃下超声2～14min；1.3)将样品提取液以4000r/min离心20min，取上清液过0.45μm的水系微孔滤膜，得到样品待测提取液；(2)上机测定，将所得的样品待测提取液通过高效液相色谱‑氢化物发生‑原子荧光光谱联用方法测定样品中的硒形态，该联用方法所用的标准溶液为：含硒代胱氨酸(GBW‑10087)、甲基‑硒代半胱氨酸(GBW‑10088)、亚硒酸根(GBW‑10032)、硒代蛋氨酸(GBW‑10034)的储备标准溶液，用0.1mol/L的盐酸逐级稀释成0ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、60ng/mL、80ng/mL的标准使用液，4℃保存；(3)结果计算：根据所测得的色谱图对硒的4种形态进行定性和定量的计算，在优化好的色谱条件下，四种硒形态的出峰顺序依次为硒代胱氨酸，甲基‑硒代半胱氨酸，亚硒酸盐，硒代蛋氨酸；以色谱峰的保留时间来定性；用峰面积外标法来定量各硒形态，公式如下：X＝C×V×F/m式中：X—样品中待测物质的含量，μg/kg；C—待测液中该物质的含量，μg/L；V—测定液体总体积，mL；F—稀释倍数；m—称样质量，g。