[发明专利]用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17-30及其构建方法和应用有效

专利信息
申请号: 201710696023.4 申请日: 2017-08-14
公开(公告)号: CN107619833B 公开(公告)日: 2021-03-02
发明(设计)人: 刘正飞;郑可;汪洋;李娜 申请(专利权)人: 华中农业大学
主分类号: C12N15/74 分类号: C12N15/74;C12N1/21;C12R1/19
代理公司: 武汉宇晨专利事务所 42001 代理人: 江丽丽;王敏锋
地址: 430070 湖*** 国省代码: 湖北;42
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摘要: 发明提供了一种用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17‑30及其构建方法和应用,构建过程主要包括从商业化质粒pCMV‑BE3中扩增rAPOBEC1‑nCas9‑UGI片段,并将该片段与含有泛宿主复制子pBBR1‑MCS‑5和非特异性sgRNA的载体通过重组反应整合到一起,随后将ccdB基因与Chl抗性基因插入sgRNA中;利用限制性内切酶BsaI酶切质粒pZF17‑30,将特异性sgRNA与线性化pZF17‑30连接,构建的载体的序列如SEQ ID NO.3所示,该载体可用于构建布鲁氏菌突变株,将virB10基因CDS区478位碱基由C突变为T。
搜索关键词: 用于 构建 布鲁氏菌 突变 质粒 pzf17 30 及其 方法 应用
【主权项】:
质粒pZF17‑30,其特征在于,所述质粒pZF17‑30的序列为SEQ ID NO.1所示。
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