[发明专利]一种敬钊毒素蛋白的高效表达及分离纯化方法在审
| 申请号： | 201710732641.X | 申请日： | 2017-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN107474127A | 公开（公告）日： | 2017-12-15 |
| 发明（设计）人： | 霍林巨;罗玉娇;张常昕;夏艳冬;司品法;张允雷;刘一佑;金伟;雷兰婷 | 申请（专利权）人： | 湖南甲骨文生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/14;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新开发*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，公开了一种敬钊缨毛蛛粗毒中活性多肽JZTX‑58的高效表达系统与分离纯化方法。本发明通过基因工程技术，采用表达质粒pVT102U/α和酿酒酵母S78菌株构成的真核表达系统，经过分离纯化、质谱分析鉴定成功表达得到敬钊毒素‑58(JZTX‑58)蛋白质，解决了直接从敬钊缨毛蛛粗毒中分离纯化而很难得到足量毒素来进行功能研究的难题，为进一步研究JZTX‑58的抗疟原虫活性奠定了重要的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 毒素 蛋白 高效 表达 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种敬钊毒素蛋白的高效表达方法，其特征在于包含以下步骤：(1)表达载体构建：按照JZTX‑58成熟肽cDNA序列设计引物，克隆到表达载体pVT102U/α，构建表达载体pVT102U/α‑JZTX‑58；(2)酵母感受态细胞制备：采用PEG/LiAc法制备酵母感受态细胞；(3)质粒转入酵母感受态细胞：采用热转化法将质粒pVT102U/‑JZTX‑58转入制备好的酵母感受态细胞，形成敬钊毒素蛋白表达系统；(4)敬钊毒素‑58(JZTX‑58)蛋白表达：选用YPD培养液对上述酵母表达系统进行扩大培养。
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